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技術(shù)文章

ELISA實驗目的

閱讀：11990發(fā)布時間：2014-2-20

 

一、實驗目的

1.深入了解ELISA 法測定抗體效價的原理。

2.掌握ELISA 法測定單克隆抗體效價的方法。

二、實驗原理

ELISA 是以免疫學反應為基礎，將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術(shù)。免疫酶技術(shù)是將酶標記在抗體/抗原分子上，形成酶標抗體/酶標抗原，稱為酶結(jié)合物。該酶結(jié)合物的酶在免疫反應后，作用于底物使之呈色，根據(jù)顏色的有無和深淺，定位或定量抗原/抗體。ELISA 法是免疫酶技術(shù)的一種，其特點是利用聚苯乙烯微量反應板(或球)吸附抗原/抗體，使之固相化，免疫反應和酶促反應都在其中進行。在每次反應后都要反復洗滌，這既保證了反應的定量關系，也避免了末反應的游離抗體/抗原的分離步驟。在ELISA 法中.酶促反應只進行一次，而抗原的免疫反應可進行一次或數(shù)次，即可用二抗(抗抗體)、三抗再次進行免疫反應。

目前常用的幾種ELISA 方法有：測定抗體的間接法，測定抗原的雙抗體夾心法和測定抗原的競爭法等。本實驗采用間接法測定單克隆抗體效價。其主要過程為：首先將已知定量抗原吸附在聚苯乙烯微量反應板的凹孔內(nèi)，加待測抗體，保溫后洗滌以除去未結(jié)合的雜蛋白質(zhì)，加酶標抗抗體，保溫后洗滌，加底物保溫30分鐘后，加酸或堿終止酶促反應，用目測或光電比色測定抗體含量。


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