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閱讀:336發(fā)布時間:2017-10-16
您在細胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點生成,首先,要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁,然后,在鏡下觀察培養(yǎng)細胞生長的狀態(tài),黑點是否游動。如果細胞被污染,微生物則會大量繁殖,培養(yǎng)基就會迅速變黃、變混濁。污染包括細菌污染、支原體污染等。如果在鏡下觀察細胞,生長狀態(tài)良好,與黑點出現(xiàn)前相比,沒有任何變化,那么,黑點的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關:
(1) 細胞生長過老,破碎的細胞殘骸;
(2) 血清質量不好,反復凍融的結果;
(3) 配制培養(yǎng)基的pH值偏高,不宜細胞生長;
(4) 配制培養(yǎng)基的水質、容器不合格??蓱秒x心、過濾的方法去除這些黑點;
(5) 培養(yǎng)原代細胞中出現(xiàn)小黑點,可能是原代組織中的雜質,多次傳代可以消除。
如何避免血清中產生沉淀?
按如下操作可避免沉淀的產生:
(1) 解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。
(2) 血清分裝凍存時,須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一。
(3) 勿直接由-20℃直接至37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質凝結而發(fā)生沉淀。
(4) 勿將血清置于37℃太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會因此受到破壞,從而影響血清的品質。
(5) 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。
(6) 若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多。
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