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使用目的：
本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中流行性出血熱抗體(EHF-Ab)表達(dá)。
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測定標(biāo)本中人流行性出血熱抗體(EHF-Ab)表達(dá)。用純化的人流行性出血熱抗原包被微孔板，制成固相抗原，可與樣品中流行性出血熱抗體相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標(biāo)記的流行性出血熱抗原結(jié)合，形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標(biāo)本中人流行性出血熱抗體(EHF-Ab)的存在與否。
試劑盒組成
1 | 20倍濃縮洗滌液 | 20ml×1瓶 | 7 | 終止液 | 3ml×1瓶 |
2 | 酶標(biāo)試劑 | 3ml×1瓶 | 8 | 陽性對照 | 0.5ml×1瓶 |
3 | 酶標(biāo)包被板 | 12孔×4條 | 9 | 陰性對照 | 0.5ml×1瓶 |
4 | 樣品稀釋液 | 3ml×1瓶 | 10 | 說明書 | 1份 |
5 | 顯色劑A液 | 3ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 2張 |
6 | 顯色劑B液 | 3ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1個(gè) |
標(biāo)本要求
1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
- 編號：將樣品對應(yīng)微孔按序編號，每板應(yīng)設(shè)陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）
- 加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將
- 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
- 樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，
- 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
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- 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
- 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
- 溫育：操作同3。
- 洗滌：操作同5。
- 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
- 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
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