AL107 糧食農(nóng)yao速測卡

1、原理

丁酰膽堿酯酶對有機磷農(nóng)yao高度敏感，根據(jù)酶活性的抑制情況就可以檢測到微量的農(nóng)yao殘留。丁酰膽堿酯酶可催化靛酚乙酸酯（紅色）水解為乙酸與靛酚（藍色），有機磷類農(nóng)yao對丁酰膽堿酯酶有抑制作用，使催化、水解、變色的過程發(fā)生改變，由此可判斷出樣品中是否有過量有機磷類農(nóng)yao的存在。

含硫類有機磷殺蟲劑是糧食生產(chǎn)中比較常用的農(nóng)yao，多數(shù)毒性較高。采用溴制劑（農(nóng)殘速測增強劑）對糧食樣品提取液進行氧化前處理，可以顯著降低這類農(nóng)yao的檢出限，提高丁酰膽堿酯酶對這類農(nóng)yao的檢測靈敏度。

2、試劑

2.1糧食農(nóng)yao速測卡：固化有丁酰膽堿酯酶和靛酚乙酸酯顯色劑的酶試紙（簡稱速測卡）。

2.2pH 7.8磷酸緩沖液：隨產(chǎn)品附送,每包用1000 mL純化水溶解。

2.3農(nóng)殘速測增強劑（溴制劑）：隨產(chǎn)品附送。

3、儀器

3.1農(nóng)yao殘留速測儀。

3.2樣品粉碎機。

3.3礱谷機。

3.4電子天平（0.1 g）。

3.5超聲波清洗儀。

3.6低速離心機。

3.7可調(diào)移液器（10～100 μL，1～5 mL）。

4、分析步驟

4.1樣品處理

4.1.1把糧食樣品粉碎至95%以上通過20目篩（稻谷應先脫殼），稱取10 g樣品，倒入提取瓶，加入30 mL pH 7.8的磷酸緩沖液混勻。

4.1.2用超聲波清洗儀超聲5 min，待溶液分層后取上層提取液2 mL于試管內(nèi)，4000 r/min離心1 min；取1 mL上清液，加入50 μL農(nóng)殘速測增強劑，備用。

4.2檢測過程

4.2.1將農(nóng)yao殘留速測儀接通電源，開機預熱，溫度達到40℃后，設定預反應時間為10min，顯色時間為3min。

4.2.2取出糧食農(nóng)yao速測卡，先對折一下形成折痕，然后插入農(nóng)yao殘留速測儀的卡槽中（白片在下，紅片在上）。先取80 μL pH 7.8磷酸緩沖液加到空白對照卡的白色yao片上，然后依次取80 μL糧食樣品提取液分別加到其余的白色yao片上，按下開始鍵，預反應10 min。

4.2.3聽到鳴音提示后將農(nóng)yao殘留速測儀上蓋合下來，使白色yao片和紅色yao片充分接觸，發(fā)生顯色反應3min。

4.2.4再次聽到鳴音提示后將農(nóng)yao殘留速測儀上蓋打開，觀察顯色反應的結果，以空白對照卡所顯藍色作為標準，判斷糧食樣品的檢驗結果。

4.2.5如果沒有條件配置農(nóng)yao殘留速測儀，也可以直接用手代替儀器進行檢測，放置10 min預反應后，用手對折捏3 min，打開觀察結果。用手操作，容易受環(huán)境溫度和各人手溫影響。

5、結果判定

結果以丁酰膽堿酯酶被有機磷類農(nóng)yao抑制（為陽性）、未抑制（為陰性）表示。

與空白對照卡比較，糧食樣品速測卡的白色yao片不變色或略有淺藍色均為陽性結果。

對測定結果為陽性的樣品，應重復檢驗2～3次，進一步通過其他分析方法確定具體農(nóng)yao種類和含量。

如果空白對照卡沒有顯示藍色，說明檢測不正常，可能是速測卡失效或者環(huán)境中有相關農(nóng)yao和干擾物質存在，或者是加樣的量不夠，需要排除有關問題后再進行檢測。

6、附則

6.1糧食農(nóng)yao速測卡技術指標

6.1.1靈敏度指標：糧食速測卡對部分農(nóng)yao的檢出限見表1。

表1 部分農(nóng)yao的檢出限

6.1.2符合率：檢出的30份以上陽性樣品中，經(jīng)氣相色譜法等方法確證，陽性結果的符合率應達到80%以上。

7說明

7.1丁酰膽堿酯酶速測卡對有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)yao非常敏感，測定時如果附近噴灑農(nóng)yao或使用衛(wèi)生殺蟲劑，以及操作者或器具沾有微量農(nóng)yao，都會造成對照和測定yao片不變藍。

7.2紅色yao片與白色yao片疊合反應的時間以3min為準，3min后藍色會逐漸加深，24h后顏色會逐漸褪去。

7.3農(nóng)殘速測增強劑具有腐蝕性、刺激性和揮發(fā)性，使用過程中要注意及時擰緊瓶蓋。

AL107 糧食農(nóng)yao速測卡