一、準(zhǔn)備工作

1、實(shí)驗(yàn)器具與材料：

（1）移液槍：200ul、10ul

（2）吸頭：200ul、20ul

（3）吸頭臺(tái)：放置200ul和20ul的吸頭一個(gè)

（4）EP管1.5ml、100ul

2、實(shí)驗(yàn)器具的處理與準(zhǔn)備

塑料制品：（包括吸頭、EP管等）

送至高壓3次，試驗(yàn)前將槍頭放入吸頭臺(tái)。

3、試劑配制和準(zhǔn)備：

（1） 雙蒸水： 100ml鹽水瓶內(nèi)裝40ml蒸餾水，送至高壓，后分裝到幾個(gè)1。5mlEP管中，-20℃中保存?zhèn)溆谩?/p>

（2） PCR中所需要的各種試劑

三、PCR時(shí)注意事項(xiàng)：

佩戴一次性手套，同時(shí)避免戴上的一次性的手套接觸可疑污染物。

四、PCR步驟

1、準(zhǔn)備100ul EP管

2、依次在管中加入：（50ul反應(yīng)體系）

 3、稍離心

4、100℃沸水浴1分鐘

5、趁熱加入Tag酶0.5ul（冰上操作）

6、再加入50ul液體石蠟封閉

7、10000rmp離心1分鐘

8、PCR條件

94℃ 1min

58℃ 50sec

72℃ 1min30sec

進(jìn)行40個(gè)循環(huán)，然后72℃ 10min 完后4℃保溫。

9、10000rmp離心5min

10、將下層水相轉(zhuǎn)入新的0.65mlEP管中，－20℃保存。

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