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上海友騰生物科技有限公司

非蛋白質氮的測定

時間:2014-3-13閱讀:264
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用凱氏法測定蛋白質的含氮量相當恒定(約14%一18%),平均含量約為16%。因此,蛋白質氮乘以6.25%即為蛋白質含量。

如果實驗需要時,也可以用以下方法直接測定。

測定的流程是,稱取0.2-0.5g風干的植物材料,放入100ml燒杯中,加入50ml水,煮沸5min,在40-50℃下保溫30min。徐徐加入10ml6%硫酸銅,搖勻,靜置l h(或過夜)。過濾,殘渣按凱氏定氮法將殘渣消化,蒸餾,測定收集液中氨,計算得出含氮量。 非蛋白質氮包括溶于水的氮化物,如氨基酸、酸性氮和有機含氮堿等。

其總量可以按總氮減去蛋白質氮計算得出,也可以按下法測定,即:稱取0.2-0.5g植物樣品,放入研缽中加2ml水,研磨成勻漿態(tài)。加入3ml 3%硫酸銅溶液,搖勻,勻漿轉移到離心管內,同時以8ml水沖洗凈殘渣。

離心管放入沸水中,用玻璃棒攪拌3min。取出加入3ml0.2mol/L的NaOH,攪勻,靜放10min,離心。將溶液放入100ml凱氏瓶中,用熱水沖洗沉淀2次,每次用10ml,每次沖洗時要向沖洗的水中加人l滴3%的硫酸銅溶液。

然后向凱氏瓶的浸出物中加入2ml濃硫酸,O.3m110%鉬酸鈉(10gNa2MoO4·2H2O溶解于100m1水中,加入0.5ml 2mol/LNaOH,加熱至沸,并煮沸15min,冷卻后補充無氨水100ml),4滴3%過氧化氫。放在電爐上蒸發(fā),直至出現(xiàn)泡沫,然后降低溫度以免泡沫濺到瓶頸上。繼續(xù)用微火加熱直至硫酸出現(xiàn)白色蒸汽。

之后用球形玻璃塞塞上凱氏瓶口,增強火力,消化到溶液透明為止。冷卻后向瓶中殘留物加入10ml水。溶液轉人50ml容量瓶中,用水沖洗殘渣,并補加水到50ml,混勻。取25ml溶液放人燒杯中滴定。加1滴0.1%甲基橙溶液,冷卻后,以2mol/LNaOH溶液滴定,直到指示劑呈現(xiàn)黃色為止,不能滴定過頭。然后加10ml含有溴酸鉀的pH 6.7的磷酸緩沖液和5ml0.12mol/L氯氨溶液(15g氯氨溶于水中,用水稀釋到1L,混勻,用棉花過濾后,裝入暗色瓶中),即用玻璃蓋蓋住燒杯,以圓周運動方式將溶液混勻,并靜置25min,其后加入2ml2%*溶液,10m18%草酸溶液。

在有淀粉指示劑存在下,用0.02mol/L*溶液滴定釋放出來的的碘。1ml0.02mol二*相當于0.09338mg氮。另按此法設不加樣品的對照,操作步驟*與上相同。

zui后按下面公式計算樣品中的非蛋白氮含量。

X(非蛋白氮含量%)=[0.4667×50×K×(6z-6)1/(25×7n) =[0.9338×K×(a-b)]/72

式中:

50為試液體積(ml);

25為用氯氨法測定時所取試液的體積(ml);

a為滴定對照所用去的0.02mol二*體積(ml);

b為滴定試液所用去的0.02mol/L*體積(ml);

K為*溶液的滴定度372為分析的樣品-

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