人夾心法測定胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-3(IGFBP-3)說明書

應(yīng)用夾心法測定標(biāo)本中人胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-3(IGFBP-3)水平。用純化
的人胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-3(IGFBP-3)抗體包被微孔板，往微孔中依次加入IGFBP-3，
再與HRP 標(biāo)記的IGFBP-3 抗體結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。
TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣
品中的IGFBP-3 呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線
計(jì)算樣品中胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-3(IGFBP-3)濃度。

人夾心法測定胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-3(IGFBP-3)說明書

用于霉菌和酵母菌的分離、計(jì)數(shù)和培養(yǎng),麥芽浸粉瓊脂（MEA）
包郵,人阿拉伯半乳糖蛋白研發(fā)(AGPs)原裝Elisa試劑盒Elisa試劑盒
包郵,大鼠同型半*研發(fā)(Hcy)原裝Elisa試劑盒Elisa試劑盒
代測免費(fèi),馬生長激素（GH）ELISA試劑
,改良胰蛋白胨大豆肉湯
代測免費(fèi),大鼠誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶(iNOS)原裝Elisa試劑盒 
包郵,人雄激素結(jié)合蛋白研發(fā)(ABP)原裝Elisa試劑盒Elisa試劑盒
包郵,大鼠性激素結(jié)合球蛋白研發(fā)(SHBG)原裝Elisa試劑盒Elisa試劑盒
包郵,豚鼠白介素12研發(fā)(IL-12/P70)原裝Elisa試劑盒Elisa試劑盒
包郵,豬胰島素樣生長因子1研發(fā)(IGF-1)原裝Elisa試劑盒Elisa試劑盒
包郵,小鼠組織型纖溶酶原激活劑研發(fā)(t-PA)原裝Elisa試劑盒Elisa試劑盒
代測免費(fèi),人游離β絨毛膜*(f-βhCG)原裝Elisa試劑盒
包郵,大鼠乙醛脫氫酶研發(fā)(ALDH)原裝Elisa試劑盒Elisa試劑盒
包郵,人苗條素受體研發(fā)(LR/Ob-R)原裝Elisa試劑盒Elisa試劑盒
代測免費(fèi),大鼠E選擇素(E-Selectin/CD62E)原裝Elisa試劑盒
代測免費(fèi),大鼠白介素6(IL-6)原裝Elisa試劑盒 

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操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10 孔，在*、第二孔中分別加標(biāo)
準(zhǔn)品100μl，然后在*、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后從*孔、第二
孔中各取100μl 分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，
混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 棄掉，再各取50μl 分別加到第五、第六孔
中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各
取50μl 分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混
勻后從第七、第八孔中分別取50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)
品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl 棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，
濃度分別為90μg/L，60μg/L ，30μg/L，15μg/L，7.5μg/L）。
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測樣
品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣
品zui終稀釋度為5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混
勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液：將30（48T 的20 倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T 的20 倍）倍稀釋后備用。
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此
重復(fù)5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應(yīng)在加終止
液后15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

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