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313次1.特異性
抗原、抗體的結(jié)合實(shí)質(zhì)上只發(fā)生在抗原的抗原決定簇與抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)之間,由于兩者在化學(xué)結(jié)構(gòu)和空間構(gòu)型上呈互補(bǔ)關(guān)系,所以抗原—抗體反應(yīng)具有高度的特異性??乖c抗體發(fā)生結(jié)合反應(yīng)的物質(zhì)基礎(chǔ)是:抗原決定簇與抗體的抗原結(jié)合部位間存在結(jié)構(gòu)的互補(bǔ)性,二者相互結(jié)合,在適宜條件下,出現(xiàn)可見反應(yīng)。二者的空間構(gòu)型互補(bǔ)程度不同,結(jié)合力強(qiáng)弱也各異,互補(bǔ)程度越高,結(jié)合能力越強(qiáng)。但是這種特異性也不是的。假使兩種化合物有著部分相同的結(jié)構(gòu),在抗原—抗體反應(yīng)中可出現(xiàn)交叉反應(yīng)。
2.可見性
天然抗原分子表面一般含多種抗原決定簇,也可含多個同一抗原決定簇,從而可提供多個抗體分子結(jié)合的部位,故為多價。若抗體分子是單體IgG,僅有兩個Fab段,其能結(jié)合兩個相同的抗原決定簇,是為2價。在抗原—抗體反應(yīng)中,若不考慮抗原、抗體的數(shù)量比例,則很可能出現(xiàn)抗原或抗體過剩。由于過剩一方的結(jié)合價不能被*結(jié)合,多呈游離形式存在,故僅形成小分子復(fù)合物,不能形成肉眼可見的結(jié)果。若抗原、抗體的數(shù)量比例恰當(dāng),抗體分子的兩個Fab段分別與兩個抗原分子結(jié)合,相互交叉連接成網(wǎng)格狀復(fù)合體,反應(yīng)體系中基本無游離的抗原或抗體。此時,可形成肉眼可見的明顯反應(yīng)物(沉淀物或凝集物)。因此,確定抗原、抗體的zui適比例十分重要,應(yīng)根據(jù)抗原的物理性狀,對抗原或抗體進(jìn)行稀釋,以確定zui適比例。
在恒定量的抗體中加入遞增量的抗原形成抗體復(fù)合物(沉淀)的量見圖。曲線的高峰部分是抗原—抗體比例zui合適的范圍,稱為等價帶(zone fequivalence)。在等價帶前后分別為抗體過剩帶和抗原過剩帶。如果抗原或抗體極度過剩,則無沉淀物形成,在免疫測定中稱為帶現(xiàn)象(zone phenomenon)??贵w過量稱為前帶(prezone),抗原過量稱為后帶(postzone)。在用免疫學(xué)方法測定抗原時,應(yīng)使反應(yīng)系統(tǒng)中有足夠的抗體量,否則測得的量會小于實(shí)際含量,甚至出現(xiàn)假陰性。
定量反應(yīng)沉淀曲線
3.可逆性
抗原與抗體的結(jié)合為分子表面的非共價結(jié)合,結(jié)合穩(wěn)定且可逆??乖c抗體結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物的過程是一種動態(tài)平衡,在一定條件下,抗原與抗體結(jié)合形成的復(fù)合物可被解離,如低pH值、高濃度鹽、凍融等??贵w的親和力(affinity)是抗原抗體間的固有結(jié)合力,高親和力抗體的抗原結(jié)合點(diǎn)與抗原的決定簇在空間構(gòu)型上非常適合,兩者結(jié)合牢固,不易解離。解離后的抗原或抗體均能保持原有的結(jié)構(gòu)和活性,因此可用親和層析法來提純抗原或抗體。
4.階段性
抗原抗體反應(yīng)的過程可分為兩個階段:特異性結(jié)合階段和反應(yīng)的可見階段。在特異性結(jié)合階段,抗原決定簇和相應(yīng)抗體Ig的Fab段的高變區(qū)相互吸引而特異結(jié)合,反應(yīng)進(jìn)行較快,大多在幾秒鐘至數(shù)分鐘內(nèi)即可完成,但無可見反應(yīng)出現(xiàn)。在可見階段,在抗原與抗體特異結(jié)合的基礎(chǔ)上,受多種因素的影響,如環(huán)境中的電解質(zhì)、溫度等,表現(xiàn)為凝集、沉淀和細(xì)胞溶解等反應(yīng)。此階段較長,可歷時數(shù)分鐘、數(shù)小時乃至數(shù)天。但若為單價抗體或半抗原,則仍不出現(xiàn)可見反應(yīng)。這兩個階段并無嚴(yán)格界限,往往*階段反應(yīng)還未*完成,即開始第二階段反應(yīng)。
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