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人白三烯D4Elisa試劑盒生產(chǎn)商,人(LTD4)說明書
本試劑僅供研究使用
目的:本試劑盒用于測定人血清,血漿及相關液體樣本中白三烯D4(LTD4)的含量。
實驗原理:
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人白三烯D4(LTD4)水平。用純化的人白三烯D4(LTD4)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入白三烯D4(LTD4),再與HRP標記的白三烯D4(LTD4)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白三烯D4(LTD4)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人白三烯D4(LTD4)濃度。
人白三烯D4Elisa試劑盒生產(chǎn)商,人(LTD4)說明書
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
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