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人T 細胞受體(TCR)酶聯(lián)免疫分析技術

時間:2015-3-2閱讀:402
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人T 細胞受體(TCR)酶聯(lián)免疫分析技術  人T 細胞受體(TCR)酶聯(lián)免疫分析技術

雙抗體夾心法測定標本中人T 細胞受體(TCR)水平。用純化的人T 細胞
受體(TCR)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入T 細胞受體
(TCR),再與HRP 標記的T 細胞受體(TCR)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)
過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)
化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的T 細胞受體(TCR)呈正相關。用酶標儀在450nm 波
長下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品中人T 細胞受體(TCR)含量。 

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1. 血清:室溫血液自然凝固10-20 分鐘,離心20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上
清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應再次離心。
2. 血漿:應根據(jù)標本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20 分鐘后,離心
20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次
離心。
3. 尿液:用無菌管收集,離心20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程
中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/
分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞
濃度達到100 萬/ml 左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20 分
2
鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)?BR>用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器
將標本勻漿充分。離心20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待
檢測,其余冷凍備用。
6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上
進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.
7. 不能檢測含NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。 

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