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人T 細(xì)胞受體(TCR)酶聯(lián)免疫分析技術(shù)

時間:2015-3-2閱讀:416
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人T 細(xì)胞受體(TCR)酶聯(lián)免疫分析技術(shù)  人T 細(xì)胞受體(TCR)酶聯(lián)免疫分析技術(shù)

雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人T 細(xì)胞受體(TCR)水平。用純化的人T 細(xì)胞
受體(TCR)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入T 細(xì)胞受體
(TCR),再與HRP 標(biāo)記的T 細(xì)胞受體(TCR)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)
過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)
化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的T 細(xì)胞受體(TCR)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波
長下測定吸光度(OD 值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人T 細(xì)胞受體(TCR)含量。 

人T 細(xì)胞受體(TCR)酶聯(lián)免疫分析技術(shù)

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人T 細(xì)胞受體(TCR)酶聯(lián)免疫分析技術(shù)

1. 血清:室溫血液自然凝固10-20 分鐘,離心20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上
清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。
2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20 分鐘后,離心
20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次
離心。
3. 尿液:用無菌管收集,離心20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程
中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/
分)。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞
濃度達(dá)到100 萬/ml 左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20 分
2
鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)?BR>用。標(biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器
將標(biāo)本勻漿充分。離心20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待
檢測,其余冷凍備用。
6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上
進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測含NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。 

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