李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基
Listera Chromogenic Medium
用途：用于李斯特氏菌的顯色培養(yǎng)，單增李斯特氏菌顯藍(lán)色，外圍有一不透明環(huán)
李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基可快速檢測食品和藥品中單增李斯特氏菌。陰性結(jié)果可在 3 天內(nèi)檢測完成。單增李斯特氏菌顯藍(lán)色，菌落周圍有一不透明環(huán)。蛋白胨提供氮源和氨基酸，氯化鈉維持滲透壓，瓊脂是凝固劑，氯化鋰抑制革蘭氏陰性菌生長，抑菌劑抑制除李氏菌外的革蘭氏陽性菌生長。
成份 (g/L)
基礎(chǔ)培養(yǎng)基：
| 營養(yǎng)物質(zhì) | 70.0 |
| 顯色劑 | 1.0 |
| pH 7.2 ± 0.2 25 ℃ |
李斯特氏菌添加劑 6.0g
李斯特氏菌抑菌劑 1 1ml*5 支
李斯特氏菌抑菌劑 2 1ml*5 支
此配方可以進(jìn)行改良或增加營養(yǎng)成份以獲得*的結(jié)果。
注意
此培養(yǎng)基僅供實(shí)驗(yàn)室使用。
李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基用法
稱取基礎(chǔ)培養(yǎng)基 14.2g 加入 180ml 蒸餾水，加熱溶解并不停攪拌；另取 1.2g 李斯特氏菌添加劑，加入 20ml 無菌水，并加入一些玻璃球，不停振動(dòng)，使其乳化均勻，將二者分別于 121 ℃高壓滅菌 15 min 。冷至 50 ℃左右時(shí)，把李斯特氏菌添加劑加入基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，并加入李斯特氏菌抑菌劑 1 和 2 各 1 支，混勻，傾入無菌平皿。使培養(yǎng)基的厚度約為 5mm ，這樣有利觀察不透明環(huán)。
李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基貯存
制備好的固體平板保存于 2-8 ℃，應(yīng)避免光線直接照射。干燥培養(yǎng)基應(yīng)放置于陰暗干燥處， 保存溫度 2-8 ℃
失效
干燥培養(yǎng)基超過保質(zhì)期、結(jié)塊和顏色變化都不能使用。
操作步驟
使用前，把制備好的培養(yǎng)基放置室溫 10-20 分鐘。
1 、按 SN 標(biāo)準(zhǔn)、 GB 標(biāo)準(zhǔn)、 FDA 標(biāo)準(zhǔn)、 ISO 標(biāo)準(zhǔn)或其它標(biāo)準(zhǔn)制備樣品液；
2 、把 25g 樣品液加入 225mlEB 增菌液中 30 ℃培養(yǎng) 48 小時(shí)；或把樣品液和 Half-Fraser 增菌液按照 1 ： 10 的比例混勻， 30 ℃培養(yǎng) 24 小時(shí)。
3 、取一環(huán)增菌液劃線接種到李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基上， 37 ℃培養(yǎng) 24-48 小時(shí)。
質(zhì)量控制
1 、外觀
此干燥培養(yǎng)基的粉末均勻，具有良好的流動(dòng)性，呈淡黃色。制備好的平板呈不透明乳白色培養(yǎng)基。
2 、微生物試驗(yàn)
在 37 ℃培養(yǎng) 24-48 小時(shí)：
| 質(zhì)控菌株 | ATCC | 生長情況 | 菌落顏色 | 不透明環(huán) |
| 單增李斯特氏菌 | 27853 | +++ | 藍(lán)色 | + |
| 綿羊李斯特氏菌 | | +++ | 藍(lán)色 | + |
| 西爾李斯特氏菌 | | +++ | 藍(lán)色 | - |
| * | 25923 | ++ | 黃色 | - |
| 大腸桿菌 | 25922 | - | - | - |
| 沙門氏菌 | | - | - | - |
典型特征
單增李斯特氏菌 37 ℃培養(yǎng) 24-28 小時(shí)， 平板上出現(xiàn)藍(lán)色菌落，菌落周圍有一不透明環(huán)。綿羊李斯特氏菌 37 ℃培養(yǎng) 48 小時(shí) ，平板上出現(xiàn)藍(lán)色菌落，菌落周圍有一不透明環(huán)。西爾李斯特氏菌 37 ℃培養(yǎng) 24-48 小時(shí)， 平板上出現(xiàn)藍(lán)色菌落，菌落周圍沒有不透明環(huán)。在食品檢測中綿羊李斯特氏菌非常少見。
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