大鼠血漿α顆粒膜蛋白（GMP-140）ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)?
【試劑盒名稱】
大鼠血漿α顆粒膜蛋白（GMP-140）定量檢測(cè)試劑盒（ELISA）
【試劑盒用途】
定量檢測(cè)大鼠血漿α顆粒膜蛋白（GMP-140）的含量。
【檢測(cè)原理】
本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）。將標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本加入到預(yù)先包被大鼠血漿α顆粒膜蛋白（GMP-140）抗體透明酶標(biāo)包被板中，溫育足夠時(shí)間后，洗滌除去未結(jié)合的成分，再加入酶標(biāo)工作液，溫育足夠時(shí)間后，洗滌除去未結(jié)合的成分。依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根過(guò)氧化物酶（HRP）催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色產(chǎn)物，在酸的作用下變成黃色，顏色的深淺與樣品中大鼠血漿α顆粒膜蛋白（GMP-140）濃度呈正相關(guān)，450nm波長(zhǎng)下測(cè)定OD值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的OD值，計(jì)算樣本中大鼠血漿α顆粒膜蛋白（GMP-140）含量。
【大鼠血漿α顆粒膜蛋白（GMP-140）ELISA試劑盒組成】
1 | 酶標(biāo)包被板 | 12孔×8條 | 7 | 顯色劑B液 | 6mL |
2 | 標(biāo)準(zhǔn)品 | 0.3mL*6管 | 8 | 終止液 | 6mL |
3 | 20倍濃縮洗滌液 | 25mL | 9 | 說(shuō)明書(shū) | 1份 |
4 | * | 1mL | 10 | 封板膜 | 2張 |
5 | 酶標(biāo)試劑 | 10mL | 11 | 密封袋 | 1個(gè) |
6 | 顯色劑A液 | 6mL |
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備注：標(biāo)準(zhǔn)品（S0→S5）濃度依次為：16、8、4、2、1、0 ng/mL.
【需要而未提供的試劑和器材】
1、37℃恒溫箱
- 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀
- 精密移液器及一次性吸頭
- 蒸餾水
- 一次性試管
- 吸水紙
【大鼠血漿α顆粒膜蛋白（GMP-140）ELISA試劑盒操作步驟】
1、準(zhǔn)備：從冰箱取出試劑盒，室溫復(fù)溫平衡30分鐘。
2、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
3、設(shè)置加樣孔：取足夠數(shù)量的酶標(biāo)包被板，固定于框架上，分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔和空白對(duì)照孔，記錄各孔位置。
4、加標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μL；空白對(duì)照孔不加。
5、加待測(cè)樣本：待測(cè)樣本孔中先加入*10μL，再加待測(cè)樣本50μL；空白對(duì)照孔不加。
6、加酶標(biāo)工作液：每孔加入酶標(biāo)工作液100μL；空白對(duì)照孔不加。
7、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
8、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板4次（也可用洗板機(jī)按說(shuō)明書(shū)操作洗板）。
9、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL，再加入顯色劑B液 50μL，37℃避光顯色15min。
10、終止：取出酶標(biāo)板，每孔加終止液50μL，終止反應(yīng)（顏色由藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11、測(cè)定：以空白孔調(diào)零，在終止后15分鐘內(nèi)，用450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的吸光值（OD值）。
12、計(jì)算：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值，計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣本的OD值，在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度，也可以使用各種應(yīng)用軟件來(lái)計(jì)算。zui終濃度為實(shí)際測(cè)定濃度乘以稀釋倍數(shù)。
【樣本要求】
1、樣本不能含疊氮鈉（NaN3），因?yàn)榀B氮鈉（NaN3）是辣根過(guò)氧化物酶（HRP）的抑制劑。
2、標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能立即試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3、樣本應(yīng)充分離心，不得有溶血及顆粒。
【注意事項(xiàng)】
1、實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
2、酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存。
3、建議所有的標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對(duì)照都做雙份檢測(cè)，取平均值，以減小實(shí)驗(yàn)誤差。
4、若顯色過(guò)淺，可適當(dāng)延長(zhǎng)底物溫育時(shí)間。
5、為避免交叉污染，標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對(duì)照每加一個(gè)就要更換一次吸頭；酶標(biāo)工作液、*和底物等公共組分，要懸臂加樣，不得碰到微孔；不得重復(fù)使用封板膜。
6、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用，不同批號(hào)的試劑不得混用。
7、底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。
【操作程序總結(jié)】
準(zhǔn)備試劑，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品
加入準(zhǔn)備好的樣品、標(biāo)準(zhǔn)品和酶標(biāo)試劑，37℃反應(yīng)60分鐘
洗板4次，加入顯色液A、B，37℃顯色15分鐘
加入終止液
15分鐘之內(nèi)讀OD值
計(jì)算
【檢測(cè)范圍】
0.5ng/mL - 16ng/mL
【規(guī)格】
96T/盒
【貯藏】
2-8℃，避光防潮保存。
【有效期】
6個(gè)月
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