摘要：
考馬斯亮蘭G250與蛋白質(zhì)結(jié)合，在0－1000ug/ml范圍內(nèi)，于波長(zhǎng)595nm處的吸光度與蛋白質(zhì)含量成正比，可用于蛋白質(zhì)含量的測(cè)定。考馬斯亮蘭G250與蛋白質(zhì)結(jié)合迅速，結(jié)合產(chǎn)物在室溫下10分鐘內(nèi)較為穩(wěn)定，是一種較好的蛋白質(zhì)定量測(cè)定方法。
1. 實(shí)驗(yàn)部分
1.1 儀器與試劑：
Labtech UV POWER紫外分光光度計(jì)；玻璃比色皿一套；考馬斯亮藍(lán)G250；
牛血清蛋白；超純水。
1.2 試液的制備：
牛血清蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液（1000ug/ml）的制備 稱取100mg牛血清蛋白置100ml容量瓶中，加入超純水溶解并定容。
考馬斯亮蘭G250試劑 稱取100mg考馬斯亮蘭G250，溶于50ml95％的乙醇后，加入120ml85％的磷酸，用水稀釋至1升。
2. 結(jié)果與討論
2.1 校正曲線的繪制
準(zhǔn)確吸取1000ug/ml牛血清蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1ml分別加入到6只10ml試管中，然后用超純水補(bǔ)充到0.1ml，各試管分別加入5ml考馬斯亮蘭G250試劑，混合均勻后，即可依次在595nm處測(cè)定吸光度。以濃度
為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制校正曲線如下圖，校正曲線方程為A=0.613556C+0.001008，R=0.9994。
2.2 精密度
配制0.6mg/ml牛血清蛋白的考馬斯亮蘭溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，得到吸光度的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。
表1 精密度測(cè)定結(jié)果
次數(shù) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | RSD% |
A | 0.2626 | 0.2622 | 0.2620 | 0.2628 | 0.2629 | 0.2626 | 0.13 |
2.3 穩(wěn)定性
取1mg/ml牛血清蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液每十分鐘測(cè)定一次，50分鐘內(nèi)的吸光度變化如下表2。
表2 穩(wěn)定度測(cè)定結(jié)果
時(shí)間（min） | A1 | A2 | A3 | A平均 |
0 | 0.5511 | 0.5523 | 0.5516 | 0.5517 |
10 | 0.5204 | 0.5184 | 0.5168 | 0.5185 |
20 | 0.4910 | 0.4901 | 0.4903 | 0.4905 |
30 | 0.4765 | 0.4716 | 0.4721 | 0.4734 |
40 | 0.4524 | 0.4475 | 0.4440 | 0.4480 |
50 | 0.3982 | 0.3935 | 0.4031 | 0.3983 |
3. 結(jié)論
該方法測(cè)定快速、簡(jiǎn)便，干擾物少，是目前靈敏度較高的蛋白質(zhì)含量測(cè)定的紫外分光光度法
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