那些年，我們一起追過的WB實驗，總是因為環(huán)節(jié)多、耗時長讓實驗室的達人們頭疼不已。雖然天天做Western blot，但不是忙上一天zui后看不清條帶，就是條帶清晰了樣品間差異很難重復(fù)。今天就讓我們來看看如何追到WB實驗這位高冷范兒的沈佳宜。

Westernblot的困惑

• Westernblot環(huán)節(jié)多、耗時長，即便是同一樣品跑同一塊膠，zui終條帶間灰度差異也高達10%。雖然天天做Western blot，但不是忙上一天zui后看不清條帶，就是條帶清晰了樣品間差異很難重復(fù)。
• 不知道曝光多久？不知道顯影多久合適？定量結(jié)果不確定？結(jié)果無法重現(xiàn)？

哥家AWB真身

    GE的Amersham WB system （AWB）集成了的Western blot實驗流程，從電泳、轉(zhuǎn)印、印跡到zui終成像分析功能，讓以往手工作坊式的WB自動化、快速化和標(biāo)準(zhǔn)化，大大減少實驗中的差異，帶來一致的、定量的蛋白質(zhì)分析結(jié)果。這臺*一體化的系統(tǒng)由哥家位于瑞典烏普薩拉的蛋白科學(xué)中心實驗室研發(fā)，于2014年底上市后便已助力了CancerCell文獻。

    AWB由主機、軟件和專屬耗材組成。主機包括兩部分：電泳與成像單元和印跡與孵育單元。

    AWB系統(tǒng)可以保證Westernblot實驗在4小時之內(nèi)完成，而無需一整天的漫長等待。

AWB重新定義實驗步驟

    *步：電泳 

    在這一步中，我們使用恒定溫度、高度均一的電流裝置，配合質(zhì)量穩(wěn)定的高分辨率預(yù)制膠和無液體的緩沖液條，將時間由2小時節(jié)省到42分鐘，也讓電泳步驟的波動降到zui低。電泳一旦到達檢測前沿，電泳自動停止并成像評估。

    第二步：轉(zhuǎn)印 

    從制作三明治，到蛋白質(zhì)從凝膠轉(zhuǎn)移到膜上，所有關(guān)鍵的參數(shù)和組件都經(jīng)過標(biāo)準(zhǔn)化，有利于帶來*的結(jié)果和zui低的背景。AWB PVDF卡設(shè)計巧妙，可避免用戶誤操作，而濾紙也已經(jīng)切好，配合轉(zhuǎn)印架的設(shè)計，減少出錯的可能。在關(guān)閉轉(zhuǎn)印架時，內(nèi)置的滾筒可以去除氣泡，增加重現(xiàn)性。內(nèi)置的冷卻也能保持恒定的溫度，避免過熱。

    第三步：孵育 

    大家都知道，抗體孵育這一步是多么的瑣碎和煩心，守在小搖床邊等待與換液，消耗了大量的時間。AWB可以做我們的換液機器人，設(shè)置好程序即可放心走開，而孵育的程序總是可控，不用擔(dān)心人工情況下這次孵育時間長了信號強那次洗滌液加少了背景高。  

    第4步：檢測和成像 

    低熒光背景的PVDF卡，經(jīng)過優(yōu)化的熒光標(biāo)記試劑，以及高性能的激光掃描儀，這些帶來了高質(zhì)量的定量數(shù)據(jù)。因此，我們可以靈敏檢測蛋白豐度的微小變化，分離和比較磷酸化與非磷酸化蛋白，并在同一塊印跡上準(zhǔn)確測定高豐度和低豐度蛋白。

    第5步：分析

    對于數(shù)據(jù)分析而言，軟件的方便好用至關(guān)重要。掃描一結(jié)束，AWB軟件自動開展數(shù)據(jù)分析，通過柱狀圖、泳道圖和表格顯示關(guān)鍵信息。它能顯示所選擇泳道和條帶檢測結(jié)果，定量目標(biāo)蛋白相對雜質(zhì)的百分比，并利用總蛋白或內(nèi)參蛋白來歸一化目標(biāo)蛋白的信號，滿足科學(xué)界對WB結(jié)果越來越重視的定量化要求。

AWB的*之處

    標(biāo)準(zhǔn)化

    預(yù)制膠的使用避免了的凝膠質(zhì)量的不穩(wěn)定，實驗的參數(shù)化和程序化避免了人為因素的不穩(wěn)定，以總蛋白作內(nèi)參結(jié)合熒光技術(shù)避免了結(jié)果分析的不穩(wěn)定。

    快速化

    我們僅花了4小時便完成了WB實驗，提高了實驗室的工作效率和競爭力。

    自動化

    我們只需要做少量的準(zhǔn)備工作便可做甩手掌柜，讓手機上的Watch app來提醒。

從此，我們不再擔(dān)心Westernblot的結(jié)果像*了。通過這臺智能的儀器、專屬的耗材和精心優(yōu)化的實驗方案，可以獲得更加定量、更容易重現(xiàn)的Westernblot數(shù)據(jù)。這樣，就能少一些重復(fù)，少一些優(yōu)化，也少一些troubleshooting。幫助實驗達人們追到WB實驗這位高冷范兒的沈佳宜。