Amicon? Ultra離心超濾管

? 高回收率 Ultracel 再生纖維素膜具有一系列截留分子量

? 高回收率> 90%

? 垂直結(jié)構(gòu)的膜減少了濃差極化，加快離心速度，快達 5 分鐘

? 熱密封膜將下游溶出物污染可能性降到zui低

? 100% 完整性檢測確保性能可靠

? 透明外殼和體積刻度方便樣品察看

? 直接吸取樣品減少處理步驟

? 高濃縮倍數(shù)：80–100 倍

應(yīng)用：

 ? 生物樣品濃縮：包括抗原、抗體、酶、核酸或微生物

 ? 組織培養(yǎng)提取物或細胞裂解液中大分子組分的純化

 ? 對稀釋或從柱洗脫液預(yù)先純化的蛋白質(zhì)進行濃縮

 ? 脫鹽和緩沖液更換

典型蛋白質(zhì)回收：

產(chǎn)品信息：

改進了垂直膜的設(shè)計，Amicon Ultra-0.5系列性能更好，離心時間更短

Amicon Ultra-4系列，用于濃縮物體積 1–4mL 的裝置

Amicon Ultra-4 超濾管超濾管使用離心管和蓋裝配。

Amicon Ultra-15系列，用于濃縮物體積 <15 mL

Amicon Ultra-15 超濾管超濾管使用離心管和蓋裝配

超濾管使用方法和注意事項
      蛋白濃縮和換Buffer通常使用的超濾管，常用Millipore的Amicon-Ultra-15超濾管（MWCO10kD）。也有其它型號 的、不同體積大小和MWCO超濾管可選，視目的蛋白的分子量與濃縮前體積、濃縮目標體積而定?？芍貜?fù)使用，使用一次就扔掉太浪費。以下是個人總結(jié)的使用方法和注意事項。
1、選擇合適的超濾管，主要考慮MWCO和濃縮體積，zui常見的是Ultra-15（10kD）。到底選擇多大截留分子量比較合適呢？10kDa、 5kDa、還是30kDa？通常應(yīng)截留分子量不應(yīng)大于目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量為35kDa，就可以選擇10kDa截留分子量的超濾 管。若目的蛋白分子量為10kD左右，則可以用截留分子量3kD的超濾管。認真閱讀使用說明書，注意超濾膜對各種化學(xué)物質(zhì)的耐受程度有所不同，表格中有。
2、新買來的超濾是干燥的，使用前加入MilliQ水，水量*過膜，冰浴或冰箱里預(yù)冷幾分鐘。然后將水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超過管頂?shù)陌拙€為準。操作要輕，加入蛋白液前，超濾管需要插在冰上預(yù)冷。
3、平衡。質(zhì)量和重心二者都要達到平衡。注意轉(zhuǎn)速和加速度不可太快，否則直接損壞超濾膜。開始離心超濾（離心機預(yù)冷至4度）。不同離心機的轉(zhuǎn)速 rpm換算成g之后，有所不同。具體可參閱附件里的說明書。離心機的加速度調(diào)至zui低檔，減小對膜的壓力。注意，一定要等離心機達到目的轉(zhuǎn)速之后，方可離開離心機，否則離心機出問題時，無法*時間處理，后果不可預(yù)測！膜與轉(zhuǎn)軸的方向根據(jù)說明書調(diào)整（角轉(zhuǎn)離心機的情況是膜與軸垂直）。在實際使用中，一般轉(zhuǎn)速開的比說明書里的要低，這樣可以延長離心管的使用壽命。
4、當濃縮到剩下1ml時，【取50ul國產(chǎn)Bradford溶液，加入10ul流穿，看有沒變藍色，以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了，將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾。要判斷是否漏管，用5mg/ml的BSA離心10min，再取流穿，跑蛋白膠或Bradford粗測】，繼續(xù)加入剩下的蛋白液濃縮（在冰上操作，防止蛋白受熱），直到所有濃縮液都加完為止。離心過程中注意是否發(fā)生蛋白沉淀，導(dǎo)致堵管。若發(fā)生沉淀，要確定沉淀的具體原因，是蛋白濃度過高還是Buffer不合適；前者可用多根超濾管同時超濾，降低濃度的辦法解決，后者的方法是換不同的Buffer，直到蛋白不發(fā)生沉淀為 止。
5、前面幾步用以濃縮蛋白，如果要換Buffer，在總蛋白液濃縮至1ml左右的時候，輕輕加入新的Buffer（經(jīng)0.22um超濾膜超濾），再 濃縮至1ml左右，連續(xù)三次，zui后一次的濃縮終體積根據(jù)需要的蛋白濃度而定，一般不多于500ul，也有濃縮至200ul以內(nèi)的情況。按照每次至少10倍 左右的體積濃縮算，三次達到1000倍以上，基本上可以達到換buffer的目的。
6、取出zui終蛋白濃縮液的操作在冰上操作，用黃槍頭（200ul）取，輕輕順著邊緣插入槍頭，輕輕吹打、混勻蛋白液，注意不要碰到超濾膜，然后吸取濃縮液，每次吸接近200ul，直到吸完。管底剩下的zui后一點濃縮液不必吸取，否則難度太大，有可能損壞超濾膜。zui后加入MilliQ水到超濾管中，沒過 超濾膜，防止膜失水變干。
7、以下是處理超濾管，重復(fù)利用超濾管的步驟。
8、倒出超濾管里的水，用milliQ水輕輕潤洗幾次，【若管底有可見的蛋白沉淀，可以先加入水，然后用槍頭吹打，注意不要碰到膜，吹打至沉淀懸起，然后倒掉，不可用自來水猛沖】然后加入0.2M的NaOH溶液，室溫放置20min，期間平衡超濾管。再離心10min。倒出殘留的NaOH溶液，將 管芯浸入MilliQ水的燒杯(1或2L)中,放置幾個小時,再換新的水,放置幾個小時，不斷稀釋NaOH濃度。50ml管和蓋子用自來水洗，內(nèi)壁再用 MilliQ水洗干凈。
9、取出浸沒的管芯，加至接近滿的MilliQ水，50ml管也加滿MilliQ水，將管芯慢慢放入50ml離心管，排出部分水，然后蓋上蓋子，放4度保存，直到下次使用。一般來說，按照上述步驟和注意事項，每根管用三四年不會壞。