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初級(jí)會(huì)員 | 第10年

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Millipore 密理博
日本東洋Advantec
PALL頗爾
Whatman沃特曼
雙圈濾紙
Whatman沃特曼診斷產(chǎn)品
Aisimo愛西默
實(shí)驗(yàn)耗材類
Qiagen凱杰
Sartorius賽多利斯
德國(guó)MN
伯樂BIO-RAD
細(xì)胞庫

Millipore超濾離心管的選擇、應(yīng)用及使用方法

時(shí)間:2015/11/13閱讀:31221
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Amicon? Ultra離心超濾管

? 高回收率 Ultracel 再生纖維素膜具有一系列截留分子量

? 高回收率> 90%

? 垂直結(jié)構(gòu)的膜減少了濃差極化,加快離心速度,快達(dá) 5 分鐘

? 熱密封膜將下游溶出物污染可能性降到zui低

? 100% 完整性檢測(cè)確保性能可靠

? 透明外殼和體積刻度方便樣品察看

? 直接吸取樣品減少處理步驟

? 高濃縮倍數(shù):80–100 


應(yīng)用:

 ? 生物樣品濃縮:包括抗原、抗體、酶、核酸或微生物

 ? 組織培養(yǎng)提取物或細(xì)胞裂解液中大分子組分的純化

 ? 對(duì)稀釋或從柱洗脫液預(yù)先純化的蛋白質(zhì)進(jìn)行濃縮

 ? 脫鹽和緩沖液更換

典型蛋白質(zhì)回收:

產(chǎn)品信息:

改進(jìn)了垂直膜的設(shè)計(jì),Amicon Ultra-0.5系列性能更好,離心時(shí)間更短

貨號(hào)

產(chǎn)品

NMWL,kDa

包裝數(shù)量

UFC500396超濾管[0.5ml 3KD]396
UFC501096超濾管[0.5ml 10KD]1096
UFC503096超濾管[0.5ml 30KD]3096
UFC505096超濾管[0.5ml 50KD]5096
UFC510096超濾管[0.5ml 100KD]10096

Amicon Ultra-4系列,用于濃縮物體積 1–4mL 的裝置

貨號(hào)

產(chǎn)品

NMWL,kDa

包裝數(shù)量

UFC800396超濾管[4ml 3KD]396
UFC801096超濾管[4ml 10KD]1096
UFC803096超濾管[4ml 30KD]3096
UFC805096超濾管[4ml 50KD]5096
UFC810096超濾管[4ml 100KD]10096

Amicon Ultra-4 超濾管超濾管使用離心管和蓋裝配。

Amicon Ultra-15系列,用于濃縮物體積 <15 mL

貨號(hào)

產(chǎn)品

NMWL,kDa

包裝數(shù)量

UFC900396超濾管[15ml 3KD]396
UFC901096超濾管[15ml 10KD]1096
UFC903096超濾管[15ml 30KD]3096
UFC905096超濾管[15ml 50KD]5096
UFC910096超濾管[15ml 100KD]10096

Amicon Ultra-15 超濾管超濾管使用離心管和蓋裝配

超濾管使用方法和注意事項(xiàng)
      蛋白濃縮和換Buffer通常使用的超濾管,常用Millipore的Amicon-Ultra-15超濾管(MWCO10kD)。也有其它型號(hào) 的、不同體積大小和MWCO超濾管可選,視目的蛋白的分子量與濃縮前體積、濃縮目標(biāo)體積而定。可重復(fù)使用,使用一次就扔掉太浪費(fèi)。以下是個(gè)人總結(jié)的使用方法和注意事項(xiàng)。
1、選擇合適的超濾管,主要考慮MWCO和濃縮體積,zui常見的是Ultra-15(10kD)。到底選擇多大截留分子量比較合適呢?10kDa、 5kDa、還是30kDa?通常應(yīng)截留分子量不應(yīng)大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量為35kDa,就可以選擇10kDa截留分子量的超濾 管。若目的蛋白分子量為10kD左右,則可以用截留分子量3kD的超濾管。認(rèn)真閱讀使用說明書,注意超濾膜對(duì)各種化學(xué)物質(zhì)的耐受程度有所不同,表格中有。
2、新買來的超濾是干燥的,使用前加入MilliQ水,水量*過膜,冰浴或冰箱里預(yù)冷幾分鐘。然后將水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超過管頂?shù)陌拙€為準(zhǔn)。操作要輕,加入蛋白液前,超濾管需要插在冰上預(yù)冷。
3、平衡。質(zhì)量和重心二者都要達(dá)到平衡。注意轉(zhuǎn)速和加速度不可太快,否則直接損壞超濾膜。開始離心超濾(離心機(jī)預(yù)冷至4度)。不同離心機(jī)的轉(zhuǎn)速 rpm換算成g之后,有所不同。具體可參閱附件里的說明書。離心機(jī)的加速度調(diào)至zui低檔,減小對(duì)膜的壓力。注意,一定要等離心機(jī)達(dá)到目的轉(zhuǎn)速之后,方可離開離心機(jī),否則離心機(jī)出問題時(shí),無法*時(shí)間處理,后果不可預(yù)測(cè)!膜與轉(zhuǎn)軸的方向根據(jù)說明書調(diào)整(角轉(zhuǎn)離心機(jī)的情況是膜與軸垂直)。在實(shí)際使用中,一般轉(zhuǎn)速開的比說明書里的要低,這樣可以延長(zhǎng)離心管的使用壽命。
4、當(dāng)濃縮到剩下1ml時(shí),【取50ul國(guó)產(chǎn)Bradford溶液,加入10ul流穿,看有沒變藍(lán)色,以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了,將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾。要判斷是否漏管,用5mg/ml的BSA離心10min,再取流穿,跑蛋白膠或Bradford粗測(cè)】,繼續(xù)加入剩下的蛋白液濃縮(在冰上操作,防止蛋白受熱),直到所有濃縮液都加完為止。離心過程中注意是否發(fā)生蛋白沉淀,導(dǎo)致堵管。若發(fā)生沉淀,要確定沉淀的具體原因,是蛋白濃度過高還是Buffer不合適;前者可用多根超濾管同時(shí)超濾,降低濃度的辦法解決,后者的方法是換不同的Buffer,直到蛋白不發(fā)生沉淀為 止。
5、前面幾步用以濃縮蛋白,如果要換Buffer,在總蛋白液濃縮至1ml左右的時(shí)候,輕輕加入新的Buffer(經(jīng)0.22um超濾膜超濾),再 濃縮至1ml左右,連續(xù)三次,zui后一次的濃縮終體積根據(jù)需要的蛋白濃度而定,一般不多于500ul,也有濃縮至200ul以內(nèi)的情況。按照每次至少10倍 左右的體積濃縮算,三次達(dá)到1000倍以上,基本上可以達(dá)到換buffer的目的。
6、取出zui終蛋白濃縮液的操作在冰上操作,用黃槍頭(200ul)取,輕輕順著邊緣插入槍頭,輕輕吹打、混勻蛋白液,注意不要碰到超濾膜,然后吸取濃縮液,每次吸接近200ul,直到吸完。管底剩下的zui后一點(diǎn)濃縮液不必吸取,否則難度太大,有可能損壞超濾膜。zui后加入MilliQ水到超濾管中,沒過 超濾膜,防止膜失水變干。
7、以下是處理超濾管,重復(fù)利用超濾管的步驟。
8、倒出超濾管里的水,用milliQ水輕輕潤(rùn)洗幾次,【若管底有可見的蛋白沉淀,可以先加入水,然后用槍頭吹打,注意不要碰到膜,吹打至沉淀懸起,然后倒掉,不可用自來水猛沖】然后加入0.2M的NaOH溶液,室溫放置20min,期間平衡超濾管。再離心10min。倒出殘留的NaOH溶液,將 管芯浸入MilliQ水的燒杯(1或2L)中,放置幾個(gè)小時(shí),再換新的水,放置幾個(gè)小時(shí),不斷稀釋NaOH濃度。50ml管和蓋子用自來水洗,內(nèi)壁再用 MilliQ水洗干凈。
9、取出浸沒的管芯,加至接近滿的MilliQ水,50ml管也加滿MilliQ水,將管芯慢慢放入50ml離心管,排出部分水,然后蓋上蓋子,放4度保存,直到下次使用。一般來說,按照上述步驟和注意事項(xiàng),每根管用三四年不會(huì)壞。

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