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中級(jí)會(huì)員 | 第16年

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酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)診斷豬瘟

時(shí)間：2011-11-2閱讀：2660
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間接法ELISA Saunder等報(bào)道并肯定了應(yīng)用快速酶標(biāo)記抗體微量技術(shù)檢查豬瘟抗體的診斷方法。先用PK-15細(xì)胞增殖豬瘟病毒作為抗原，包被微量滴定板，隨后加入被檢血清（*抗體），沖洗后再加入酶標(biāo)記的兔抗豬Y球蛋白，再經(jīng)沖洗，zui后加入底物顯色。Saunder通過60份血清檢測結(jié)果，證明酶標(biāo)記抗體法和血清中和試驗(yàn)的符合率在99％以上。但中和試驗(yàn)需要18h才能獲得結(jié)果，酶標(biāo)記抗體僅需1～2h。

必須指出，Saunder等所得到的結(jié)果是用酶標(biāo)記抗體間接法檢測豬瘟抗體。由于我國普遍開展兔化弱毒疫苗的預(yù)防注射，豬血清中幾乎都有豬瘟抗體，這樣就給酶標(biāo)抗體診斷法帶來困難。

區(qū)分豬瘟疫苗抗體的ELISA（單克隆抗體ELISA） 丘惠深等分別應(yīng)用淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)，研制出可以鑒別豬瘟兔化弱毒、豬瘟病毒、牛病毒性腹瀉病毒及邊界病病毒的特異性豬瘟兔化弱毒單抗及豬瘟石門株單抗。用親和層析法制成單抗酶聯(lián)試劑后，可將疫苗注射血清、豬毒感染血清、混合血清和豬瘟陰性血清區(qū)別開來。房德興等建立了單克隆抗體ELISA抑制法，用于檢測細(xì)胞培養(yǎng)物中的豬瘟兔化弱毒，可望取代兔體接種試驗(yàn)，檢測疫苗效價(jià)。

夾心ELISA 夾心ELISA是檢測病毒抗原的常用方法，國內(nèi)外許多學(xué)者均已發(fā)展或報(bào)道了夾心ELISA方法的研究應(yīng)用。Kosmidou等（1995）使用單克隆抗體技術(shù)建立了一種豬瘟病毒抗原的ELISA檢測方法。湯賽冬等建立了檢測豬瘟病毒抗原的夾心ELISA方法，該方法是先以zui適量純化豬瘟病毒抗體包被酶標(biāo)板，加入待測抗原，再加入酶標(biāo)抗體，zui后加入底物及終止液。

豬瘟RT-PCR ELISA診斷方法 反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）已廣泛應(yīng)用于痘病毒和豬瘟病毒的診斷。在國外，有些學(xué)者結(jié)合RT-PCR技術(shù)，又建立了用特異性熒光探針和生物素標(biāo)記的捕獲探針檢測CSFV的新方法。在我國，孫世琪等建立了豬瘟RT-PCRELISA診斷方法。從CSFV 5，-UTR設(shè)計(jì)特異性引物和捕獲探針，用地高辛標(biāo)記RT-PCR產(chǎn)物，再以RT-PCREIASA方法，用生物素標(biāo)記的探針在鏈親和素包被的微量板孔中雜交捕獲RT-PCR產(chǎn)物，并進(jìn)行免疫顯色；通過對(duì)CSFV標(biāo)準(zhǔn)菌株和分離菌株進(jìn)行檢測，建立一種特異性強(qiáng)、敏感性高、快速、簡便且實(shí)用的非放射性檢測CSFV的方法，為CSFV的分子流行病學(xué)調(diào)查和早期診斷提供了一條新的途徑。
 

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