ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理

大鼠促性腺激素釋放激素(GnRH)試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人大鼠促性腺激素釋放激素(GnRH)水平。用純化的人大鼠促性腺激素釋放激素(GnRH)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入大鼠促性腺激素釋放激素(GnRH)，再與HRP標(biāo)記的大鼠促性腺激素釋放激素(GnRH)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠促性腺激素釋放激素(GnRH)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人大鼠促性腺激素釋放激素(GnRH)水平。

操作步驟

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在*、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl，然后在*、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。大鼠促性腺激素釋放激素(GnRH)試劑盒（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為180U/mL, 120U/mL , 60U/mL, 30U/mL,15 U/mL）。

2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

大鼠促性腺激素釋放激素(GnRH)試劑盒其它同類試劑盒*如下：

HZB004Hu    人白細(xì)胞關(guān)聯(lián)免疫球蛋白樣受體1(LAIR1)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Leukocyte Associated Immunoglobulin Like Receptor 1 (LAIR1) 
HZB179Hu    人白介素31(IL31)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Interleukin 31 (IL31) 
HZC006Hu    人白介素8受體β(IL8Rβ)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Interleukin 8 Receptor Beta (IL8Rb) 
HZD367Hu    人Kruppel樣因子2(KLF2)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Kruppel Like Factor 2, Lung (KLF2) 
HZF998Hu    人神經(jīng)肽Y受體Y5(NPY5R)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Neuropeptide Y Receptor Y5 (NPY5R) 
HZF999Hu    人神經(jīng)肽Y受體Y1(NPY1R)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Neuropeptide Y Receptor Y1 (NPY1R) 
HZG000Hu    人神經(jīng)肽Y受體Y2(NPY2R)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Neuropeptide Y Receptor Y2 (NPY2R) 
HZA481Hu    人淋巴毒素β受體(LTβR)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Lymphotoxin Beta Receptor (LTbR) 
HZD833Hu    人Ⅹ組磷脂酶A2(PLA2G10)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Phospholipase A2, Group X (PLA2G10) 
HZE132Hu    人防御素β103A(DEFβ103A)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Defensin Beta 103A (DEFb103A) 
HZC908Hu    人成纖維細(xì)胞生長因子8(FGF8)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Fibroblast Growth Factor 8, Androgen Induced (FGF8) 
HZD335Hu    人阿米洛利敏感鈉離子通道蛋白1γ(SCNN1γ)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Amiloride Sensitive Sodium Channel Subunit Gamma (SCNN1g) 
HZD336Hu    人阿米洛利敏感鈉離子通道蛋白1β(SCNN1β)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Amiloride Sensitive Sodium Channel Subunit Beta (SCNN1b) 
HZJ201Hu    人動力蛋白軸絲重鏈11(DNAH11)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Dynein, Axonemal, Heavy Chain 11 (DNAH11) 
HZB504Hu    人腫瘤壞死因子受體超家族成員1B(TNFRSF1B)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Tumor Necrosis Factor Receptor Superfamily, Member 1B (TNFRSF1B) 
HZL997Hu    人蛋白L-異天冬氨酸-O-甲基轉(zhuǎn)移酶(PCMT1)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Protein L-Isoaspartate-O-Methyltransferase (PCMT1) 
HZD035Hu    人突觸融合蛋白1A(STX1A)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Syntaxin 1A, Brain (STX1A) 
HZJ209Hu    人動力蛋白胞漿1重鏈1(DYNC1H1)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Dynein, Cytoplasmic 1, Heavy Chain 1 (DYNC1H1) 
HZH747Hu    人皮屑蛋白樣蛋白1(LEPREL1)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Leprecan Like Protein 1 (LEPREL1) 
HZC293Hu    人接觸蛋白關(guān)聯(lián)蛋白樣蛋白2(CNTNAP2)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Contactin Associated Protein Like Protein 2 (CNTNAP2) 
HZE486Hu    人溶質(zhì)載體家族39成員6(SLC39A6)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Solute Carrier Family 39, Member 6 (SLC39A6) 
HZE528Hu    人磷酸甘油酸變位酶1(PGAM1)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Phosphoglycerate Mutase 1, Brain (PGAM1) 
HZC917Hu    人成纖維細(xì)胞生長因子19(FGF19)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Fibroblast Growth Factor 19 (FGF19) 大鼠促性腺激素釋放激素(GnRH)試劑盒
HZA989Hu    人CD160分子(CD160)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Cluster Of Differentiation 160 (CD160) 
CED064Hu    人促腎上腺皮質(zhì)激素樣中葉肽(CLIP)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Corticotropin Like Intermediate Lobe Peptide (CLIP)