肺結(jié)核(tuberculosis)是目前世界上致病率與致死率zui高的傳染病之一，根據(jù)世界衛(wèi)生組織的報(bào)告僅2012年中患病人數(shù)達(dá)到了800萬人，其中100萬以上死亡。隨著肺結(jié)核的致病菌-結(jié)核桿菌（Mycobacterium tuberculosis，Mtb）近年來抗藥性越來越強(qiáng)，許多結(jié)核病患者沒有得到有效的藥物治療。結(jié)核桿菌在長年的進(jìn)化選擇下，能夠寄生在宿主的巨噬細(xì)胞內(nèi)部，并能有效避免免疫系統(tǒng)的感知與清除。因而，尋找合適的靶點(diǎn)分子進(jìn)行藥物設(shè)計(jì)是清除結(jié)合桿菌的關(guān)鍵所在。

PtpA是結(jié)合桿菌分泌的一類去磷酸化酶（phosphotase： for protein dephosphorylation）。由于其可以分泌到細(xì)菌外部，即巨噬細(xì)胞胞漿中，所以是zui容易設(shè)計(jì)的藥物靶點(diǎn)。然而，目前針對其活性區(qū)域的抑制劑特異性不高，導(dǎo)致此類藥物副作用太大。zui近，中國科學(xué)院微生物所劉翠華博士課題組在《nature immunology》雜志在線發(fā)表了她們對于結(jié)核桿菌分泌的ptpA的致病機(jī)制的研究，并希望可以通過此研究成果針對ptpA或者其底物分子設(shè)計(jì)相關(guān)的藥物。

首先，作者利用HEK293T以及HELA報(bào)告基因模型檢測了ptpA對于外界刺激引起的下游轉(zhuǎn)錄因子激活的調(diào)節(jié)作用。研究發(fā)現(xiàn)，ptpA可以有效抑制由TNF-a，IL-1b引起的NF-kB激活，而且可以抑制由小G蛋白ras引起的AP-1的激活。作者進(jìn)一步通過野生型Mtb以及ptpA缺失突變體進(jìn)行體外巨噬細(xì)胞感染。生化檢測發(fā)現(xiàn)：ptpA可以有效抑制感染過程中NF-kB的激活以及JNK，p38的磷酸化，但是對于ERK蛋白的磷酸化沒有明顯影響。說明ptpA可以通過某種方式抑制MEK信號通路與NF-kB信號通路的傳遞。

之后，作者檢測了結(jié)核桿菌感染巨噬細(xì)胞后，細(xì)胞內(nèi)TNF-a，IL-1b的表達(dá)水平以及上清中的釋放情況，結(jié)果顯示：缺失ptpA后，結(jié)核桿菌能夠引起更多的IL-1b以及TNF的產(chǎn)生，在人為地向突變體中轉(zhuǎn)入ptpA后，兩種細(xì)胞因子的產(chǎn)量收到了抑制。另一方面，如果結(jié)核桿菌中過量表達(dá)ptpA，那么TNF-a與IL-1b的產(chǎn)量將會受到進(jìn)一步的抑制。接下來，作者通過腹腔注射的方式向小鼠體內(nèi)感染結(jié)核桿菌，得到了與體外相似的結(jié)果，同時(shí)，結(jié)核桿菌的增殖水平以及組織遭受感染的嚴(yán)重程度也與之相符。以上說明ptpA缺失可以抑制下游細(xì)胞因子的表達(dá)，從而保護(hù)自身不受免疫系統(tǒng)清除。

那么ptpA是如何起作用的呢？作者發(fā)現(xiàn)，ptpA的功能受到其去磷酸化活性的影響：當(dāng)人為地將其催化活性位點(diǎn)突變（D126A）之后， ptpA抑制JNK以及p38的能力均受到了影響，而NF-kB的抑制效應(yīng)則不受到此影響。之后，作者通過酵母雙雜的實(shí)驗(yàn)鑒定出泛素蛋白（Ubiquitin）是可能與ptpA相互作用的靶向分子。 通過分子模擬以及突變后的各種生化分析，作者發(fā)現(xiàn)ptpA里面有一段a-helix與泛素蛋白存在直接的相互作用。下游的功能檢測也證明：ptpA表面a-helix的突變與去磷酸化活性位點(diǎn)的突變均對ptpA的抑制能力產(chǎn)生影響。  體內(nèi)實(shí)驗(yàn)也證實(shí)了這一觀點(diǎn)。

但是ptpA對NF-kB信號的抑制通并不依賴于ptpA的去磷酸化活性。作者仍舊通過酵母雙雜交的方法鑒定出TAB3蛋白與ptpA也存在相互作用。TAB3是TAB家族的成員，在TRAF下游介導(dǎo)NF-kB的激活。作者通過免疫共沉淀技術(shù)證明ptpA與TAB3確實(shí)存在相互作用，同時(shí)發(fā)現(xiàn)ptpA能夠抑制TRAF2，TRAF6，TAB3等引起的NF-kB的影響，但并不抑制TAK1與TAB1引起的NF-kB的激活。之后，作者發(fā)現(xiàn)在有ptpA存在的情況下，TAB3的K-63泛素化受到了抑制，說明ptpA通過抑制TAB3的K-63泛素化來抑制其正常激活NF-kB的功能，TAB3的RNA干擾實(shí)驗(yàn)也證實(shí)了這一說法。

綜上，作者利用一系列生化的手段證明了結(jié)核桿菌ptpA抑制巨噬細(xì)胞AP-1，NF-kB激活的兩種不同的分子機(jī)制。也許在臨床上我們能夠利用這一發(fā)現(xiàn)設(shè)計(jì)更加特異性針對ptpA功能的藥物用于治療結(jié)核病患者中文名稱：人白介素27(IL27)ELISA試劑盒價(jià)格96t/48t    英文名稱：ELISA Kit for Interleukin 27 (IL27)
中文名稱：人多巴胺受體D3(DRD3)ELISA試劑盒價(jià)格96t/48t    英文名稱：ELISA Kit for Dopamine Receptor D3 (DRD3)
中文名稱：人糖原磷酸化酶M(PYGM)ELISA試劑盒價(jià)格96t/48t    英文名稱：ELISA Kit for Glycogen Phosphorylase, Muscle (PYGM)
中文名稱：人糖原磷酸化酶L(PYGL)ELISA試劑盒價(jià)格96t/48t    英文名稱：ELISA Kit for Glycogen Phosphorylase, Liver (PYGL)
中文名稱：人胃泌素抑制肽(GIP)ELISA試劑盒價(jià)格96t/48t    英文名稱：ELISA Kit for Gastric Inhibitory Polypeptide (GIP)
中文名稱：人抗增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)ELISA試劑盒價(jià)格96t/48t    英文名稱：ELISA Kit for Prolife英文名稱：Rating Cell Nuclear Antigen (PCNA)
中文名稱：人肌原纖蛋白1(FBN1)ELISA試劑盒價(jià)格96t/48t    英文名稱：ELISA Kit for Fibrillin 1 (FBN1)
中文名稱：人卵泡抑素(FS)ELISA試劑盒價(jià)格96t/48t    英文名稱：ELISA Kit for Follistatin (FS)
中文名稱：人補(bǔ)體3a(C3a)ELISA試劑盒價(jià)格96t/48t    英文名稱：ELISA Kit for Complement Component 3a (C3a)
中文名稱：人補(bǔ)體成分(C)ELISA試劑盒價(jià)格96t/48t    英文名稱：ELISA Kit for Complement Component (C)
中文名稱：人C4結(jié)合蛋白α(C4BPα)ELISA試劑盒價(jià)格96t/48t    英文名稱：ELISA Kit for C4 Binding Protein Alpha (C4BPa)
中文名稱：人二肽基肽酶Ⅳ(DPP4)ELISA試劑盒價(jià)格96t/48t    英文名稱：ELISA Kit for Dipeptidyl Peptidase IV (DPP4)
中文名稱：人血管緊張素Ⅰ(AngⅠ)ELISA試劑盒價(jià)格96t/48t    英文名稱：ELISA Kit for Angiotensin I (AngI)
中文名稱：人低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF1α)ELISA試劑盒價(jià)格96t/48t    英文名稱：ELISA Kit for Hypoxia Inducible Factor 1 Alpha (HIF1a)
中文名稱：人B-淋巴細(xì)胞激活抗原B7-2(LAB7-2)ELISA試劑盒價(jià)格96t/48t    英文名稱：ELISA Kit for B-Lymphocyte Activation Antigen B7-2 (LAB7-2)
中文名稱：人90kDa熱休克蛋白β1(HSP90β1)ELISA試劑盒價(jià)格96t/48t    英文名稱：ELISA Kit for Heat Shock Protein 90kDa Beta 1 (HSP90b1)
中文名稱：人超氧化物歧化酶(SOD)ELISA試劑盒價(jià)格96t/48t    英文名稱：ELISA Kit for Superoxide Dismutases (SOD)
中文名稱：人60kD熱休克蛋白(HSPD1)ELISA試劑盒價(jià)格96t/48t    英文名稱：ELISA Kit for Heat Shock 60kD Protein 1, Chaperonin (HSPD1)
中文名稱：人血管緊張素原(AGT)ELISA試劑盒價(jià)格96t/48t    英文名稱：ELISA Kit for Angiotensinogen (AGT)
中文名稱：人脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(CETP)ELISA試劑盒價(jià)格96t/48t    英文名稱：ELISA Kit for Cholesteryl Ester Transfer Protein (CETP)
中文名稱：人神經(jīng)型一氧化氮合酶()ELISA試劑盒價(jià)格96t/48t    英文名稱：ELISA Kit for Nitric Oxide Synthase 1, Neuronal ()
中文名稱：人α1-酸性糖蛋白(α1AGP)ELISA試劑盒價(jià)格96t/48t    英文名稱：ELISA Kit for Alpha-1-Acid Glycoprotein (a1AGP)
中文名稱：人結(jié)合珠蛋白(Hpt)ELISA試劑盒價(jià)格96t/48t    英文名稱：ELISA Kit for Haptoglobin (Hpt)
中文名稱：人神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)ELISA試劑盒價(jià)格96t/48t    英文名稱：ELISA Kit for Glial Fibrillary Acidic Protein (GFAP)
中文名稱：人神經(jīng)介素B(NMB)ELISA試劑盒價(jià)格96t/48t    英文名稱：ELISA Kit for Neuromedin B (NMB)
中文名稱：人過氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ)ELISA試劑盒價(jià)格96t/48t    英文名稱：ELISA Kit for Peroxisome Prolife英文名稱：Rator Activated 
中文名稱：人凝血因子Ⅱ(F2)ELISA試劑盒價(jià)格96t/48t    英文名稱：ELISA Kit for Coagulation Factor II (F2)
中文名稱：人甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白(PTHrP)ELISA試劑盒價(jià)格96t/48t    英文名稱：ELISA Kit for Pa英文名稱：Rathyroid Hormone Related Protein (PTHrP)
中文名稱：人丙酮酸脫氫酶磷酸酶(PDP)ELISA試劑盒價(jià)格96t/48t    英文名稱：ELISA Kit for Pyruvate Dehydrogenase Phosphatase (PDP)
中文名稱：人補(bǔ)體成分3(C3)ELISA試劑盒價(jià)格96t/48t    英文名稱：ELISA Kit for Complement Component 3 (C3)