ELISA試劑盒怎樣操作咱們“實(shí)驗(yàn)室見”

怎么挑選ELISA試劑盒？
*步、清晰檢查何種蛋白 。
第二步、清晰編碼該蛋白的基因與其它哪些物種同源性 。
第三步、尋找檢查這些物種蛋白的試劑盒。
第四步、咨詢商家ELISA是試劑盒運(yùn)用的抗體類型：多抗仍是單抗？ 單抗是針對啥抗原決議簇的？
第五步、 做出自個(gè)的判別該買哪個(gè)試劑盒。

ELISA試劑盒試驗(yàn)操作過程
1．運(yùn)用前，將一切試劑充沛混勻。不要使液體發(fā)生很多的泡沫，防止加樣時(shí)參加很多的氣泡，發(fā)生加樣上的差錯(cuò)。
2．依據(jù)待測樣品數(shù)量加上規(guī)范品的數(shù)量決議所需的板條數(shù)。每個(gè)規(guī)范品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品依據(jù)自個(gè)的數(shù)量來定，能運(yùn)用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后參加50ul于反響孔內(nèi)。
3．參加稀釋好后的規(guī)范品50ul于反響孔、參加待測樣品50ul于反響孔內(nèi)。當(dāng)即參加50ul的生物素符號的抗體。蓋上膜板，悄悄振動混勻，37℃溫育1小時(shí)。
4．甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗刷液，振動30秒，甩去洗刷液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。假如用洗板機(jī)洗刷，洗刷次數(shù)添加一次。
5．每孔參加80ul的親和鏈酶素-HRP，悄悄振動混勻，37℃溫育30分鐘。
6．甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗刷液，振動30秒，甩去洗刷液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。假如用洗板機(jī)洗刷，洗刷次數(shù)添加一次。
7．每孔參加底物A、B各50ul，悄悄振動混勻，37℃溫育10分鐘。防止光照。
8．取出酶標(biāo)板，敏捷參加50ul停止液，參加停止液后應(yīng)當(dāng)即測定成果。
9．在450nm波利益測定各孔的OD值。

ELISA試劑盒操作時(shí)應(yīng)當(dāng)留意哪些？
1．試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，運(yùn)用前康復(fù)到室溫。稀稀往后的規(guī)范品應(yīng)丟掉，不行保留。
2．試驗(yàn)中不必的板條應(yīng)當(dāng)即放回包裝袋中，密封保留，防止蛻變。
3．不必的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不一樣批號的試劑不要混用。保質(zhì)前運(yùn)用。
4．運(yùn)用一次性的吸頭防止穿插污染，汲取停止液和底物A、B液時(shí)，防止運(yùn)用帶金屬有些的加樣器。
5．運(yùn)用干凈的塑料容器裝備洗刷液。運(yùn)用前充沛混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6．洗刷酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充沛拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反響孔中吸水。
7．底物A應(yīng)蒸發(fā)，防止長期翻開蓋子。底物B對光敏感，防止長期露出于光下。防止用手觸摸，有毒。試驗(yàn)完成后應(yīng)當(dāng)即讀取OD值。
8．參加試劑的次序應(yīng)共同，以確保一切反響板孔溫育的時(shí)刻一樣。
9．依照說明書中標(biāo)明的時(shí)刻、加液的量及次序進(jìn)行溫育操作。