ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)具體步驟解析

1.ELISA試劑盒將抗原抗體反響固相化：即實(shí)驗(yàn)中的包被環(huán)節(jié)，使抗原或抗體吸附于固相載體外表。其機(jī)制可能是聚苯乙烯外表間的疏水基團(tuán)能夠無挑選性地吸附蛋白分子。此物理性吸附不損壞蛋白分子結(jié)構(gòu)，堅(jiān)持其生物學(xué)特性和免疫學(xué)活性；
2.關(guān)閉：固相吸附蛋白對錯特異性的，在包被意圖免疫蛋白后，未吸附蛋白的固相外表依然有吸附其它蛋白的才能，為了保證抗原抗體反響的特異性，因而，包被剩下的固相外表應(yīng)該用抗原抗體反響無關(guān)蛋白關(guān)閉。一般以為牛血清白蛋白是zui為抱負(fù)的關(guān)閉劑，也可用脫脂奶粉、明膠、牛血清替代。
3.抗原抗體反響：抗原或抗體在恰當(dāng)?shù)慕橘|(zhì)下可進(jìn)行特異的抗原抗體反響。
4.酶反響：酶能夠經(jīng)過共價鍵與抗原或抗體連接構(gòu)成物，當(dāng)抗原抗體反響的時分，被檢查靶方針中也了酶分子。
5.底物反響：在抗原抗體中的酶分子，能夠促使底物發(fā)作色彩反響，檢查人員能夠裸眼調(diào)查，能夠經(jīng)過色彩來斷定是不是有免疫反響的存在，經(jīng)過色彩的深淺判斷標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的含量，也可借用酶標(biāo)儀在恰當(dāng)?shù)牟ㄩL讀取吸光度值。
ELISA試劑盒的基本原理即是將抗原抗體固定到特定的載體上進(jìn)行反響，并經(jīng)過酶催化底物發(fā)作化學(xué)變化將抗原抗體反響經(jīng)過色彩的方式顯現(xiàn)出來。