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技術(shù)解析:ELISA試劑盒的顯色弱問(wèn)題
顯色一定要控制時(shí)間,根據(jù)試劑盒說(shuō)明操作即可。一般來(lái)說(shuō),顯色時(shí)間過(guò)短,結(jié)果偏低;顯色時(shí)間過(guò)長(zhǎng),空白增高或者非特異性顯色增加。
ELISA顯色弱的可能原因
對(duì)應(yīng)的解決方法
超過(guò)有效期的產(chǎn)品可能會(huì)產(chǎn)生很弱的信號(hào)
檢查產(chǎn)品的有效期
加入試劑的體積和時(shí)間有誤
確定所使用的每一個(gè)試劑的體積正確的和加入的時(shí)間是適當(dāng)?shù)?/p>
試劑、樣品用前未能平衡
用前試劑、樣品置室溫平衡10分鐘左右
縮短孵育時(shí)間能使實(shí)驗(yàn)的信號(hào)變?nèi)?/p>
檢查孵育的時(shí)間
在溫度變化的環(huán)境內(nèi)孵育酶標(biāo)板
確定孵育的溫度,應(yīng)避免溫度的變化
使用了被污染的試劑
檢查試劑是否被污染
標(biāo)準(zhǔn)品/標(biāo)本制備方法不規(guī)范
檢查標(biāo)準(zhǔn)品/標(biāo)本的制備,標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)按說(shuō)明書進(jìn)行復(fù)溶和稀釋。低溫貯存的標(biāo)本避免反復(fù)凍融,嚴(yán)禁使用溶血標(biāo)本。樣品用NaN3防腐,抑制了酶的反應(yīng)
顯色底物制備不規(guī)范
檢查底物的制備,如體積是否正確,混合是否恰當(dāng)充分
檢測(cè)時(shí)間不當(dāng)
是否在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)檢測(cè)
儀器設(shè)定不正確,濾光片不匹配
儀器是否設(shè)定正確,濾光片的使用等
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