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為比較3種抗牛支原體(M.bovis)血清抗體的ELISA試劑盒檢測效果,ELISA試劑盒本實驗應(yīng)用3種檢測M.bovis血清抗體ELISA診斷試劑盒對38份陽性樣品(天然感染19份,人工感染18份)和37份陰性樣品進行檢測。

用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，與CUTOFF值比擬較，從而判斷標(biāo)本中牛支原體的存在與否。ELISA試劑盒此外,3種試劑盒對牛傳染性肋膜肺炎尺度血清(PS2)的檢測結(jié)果顯示HVRI試劑盒和Kit 1均為為陰性,Kit 2為陽性。因此,HVRI試劑盒與Kit 1更適于M.bovis檢測和開展流行病學(xué)調(diào)查。用純化的牛支原體抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中支原體相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后再與HRP標(biāo)記的支原體抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)由*洗滌后加底物TMB顯色。

牛支原體酶聯(lián)免疫分析試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法(ELISA)測定標(biāo)本中牛支原體。一致性檢修結(jié)果顯示:HVRI試劑盒與Kit 1的一致性較高;Kit 2與HVRI試劑盒、Kit 2與Kit 1有中度的一致性。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*的黃色。ELISA試劑盒結(jié)果表明:本實驗室制備的HVRI試劑盒與商品化試劑盒Kit 1的檢測結(jié)果和綜合檢測結(jié)果符合率分別達(dá)到92%和96%;而商品化試劑盒Kit 2的檢測結(jié)果與綜合檢測結(jié)果符合率僅為74.67%。