細(xì)胞支原體污染一般情況及預(yù)防措施:

細(xì)胞株若受到細(xì)菌、真菌、支原體、或是特定病毒等之污染時(shí)，會(huì)嚴(yán)重的影響實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。而細(xì)菌、真菌等之微生物污染時(shí)，較易自培養(yǎng)基等的外觀變化察覺。但是若受到支原體之污染時(shí)，細(xì)胞之外觀較無明顯變化，但是其污染會(huì)造成細(xì)胞之生長速率緩慢、細(xì)胞產(chǎn)生病變之型態(tài)改變等等變化。

各國細(xì)胞庫支原體污染的統(tǒng)計(jì)表，如下：
    國家　   受支原體污染(%)   報(bào)告年度
    USA－FDA   15   1993(past 30 years)
    USA－ATCC   15-20   1992
    Japan－(IFO，RIKEN，JCR 80~30~22   1981 1987-19931998
    Germany－DSM   36   1990-1994
    Argentina   65   1987
    Israel   32   1986-1993
    China   95    1990

造成支原體高污染率的原因?yàn)椋?nbsp;
    1.支原體size 0.1~0.8 um，無細(xì)胞壁，可透過一般過濾膜（0.22-0.45 um） 
    2.支原體污染時(shí)，沒有明顯的肉眼或一般光學(xué)顯微鏡可觀察到的特征變化 
    3.過去缺乏簡(jiǎn)單、快速且可靠的檢測(cè)方式 
    4.細(xì)胞流通間缺乏品管，造成實(shí)驗(yàn)室間的相互污染 
    5.研究或操作人員忽略污染問題

而支原體污染來源： 
    1.已受污染的細(xì)胞 
    2.操作人員的疏失 
    3.已受污染的培養(yǎng)基、血清 
    4.操作環(huán)境不良、實(shí)驗(yàn)器具不潔等

由于支原體為人體口腔中之正常菌叢，實(shí)驗(yàn)室之操作人員的污染亦可能為污染源，須十分注意。而萬一細(xì)胞已受支原體污染時(shí)，*的處理原則為將細(xì)胞高壓滅菌后丟棄，以免污染其它潔凈的細(xì)胞株。但是若是堅(jiān)持要作去除支原體污染，有以下幾種方法，只不過結(jié)果會(huì)與原始的細(xì)胞特性有差異。

去除支原體污染： 
    1. 抗生素處理：BM-cyclin（Roche），MRA（mycoplasma removal agent，ICN），Ciprofloxcin（Bayer），Enrofloxacin（Bayer） 
    2. Nucleic acid metabolites：5-bromouracil，Hoechst 33258，bromodeoxyuridine 
    3. Anti-sera

預(yù)防與控制方面可從以下各點(diǎn)加強(qiáng)注意：
    設(shè)備方面： 
    1.使用已作支原體測(cè)試ok之細(xì)胞株 
    2.于另一隔離之區(qū)域操作未知是否有支原體污染之細(xì)胞 
    3.使用不添加抗生素的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞 
    檢測(cè)方面：定期以標(biāo)準(zhǔn)的支原體檢測(cè)方法檢測(cè)細(xì)胞、培養(yǎng)基、血清、ddH2O有否被支原體污染。
    實(shí)驗(yàn)操作人員之無菌觀念與無菌操作技術(shù)之要求。

有關(guān)支原體污染之問題與回答：
    Q:應(yīng)如何避免細(xì)胞污染？
    A:細(xì)胞污染的種類可分成細(xì)菌、酵母菌、霉菌、病毒和支原體。 主要的污染原因?yàn)闊o菌操作技術(shù)不當(dāng)、操作室環(huán)境不佳、污染之血清和污染之細(xì)胞等。 嚴(yán)格之無菌操作技術(shù)、清潔的環(huán)境、與品質(zhì)良好之細(xì)胞來源和培養(yǎng)基配制是減低污染之方法。
    Q:如果細(xì)胞發(fā)生微生物污染時(shí)， 應(yīng)如何處理？
    A:直接滅菌后丟棄之。