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【原理及意義】
顆粒性抗原（如細(xì)菌、細(xì)胞）與相應(yīng)抗體特異性結(jié)合，在適當(dāng)?shù)碾娊赓|(zhì)環(huán)境中形成肉眼可見的凝集塊的現(xiàn)象，稱為凝集反應(yīng)。包括直接凝集反應(yīng)（細(xì)菌或細(xì)胞等顆粒性抗原與相應(yīng)抗體直接反應(yīng)出現(xiàn)的凝集現(xiàn)象）和間接凝集反應(yīng)（將可溶性抗原包被在紅細(xì)胞或乳膠顆粒表面，再與相應(yīng)抗體發(fā)生反應(yīng)出現(xiàn)的凝集現(xiàn)象）。凝集反應(yīng)廣泛地應(yīng)用于疾病的診斷和各種抗原性質(zhì)的分析。
（一）直接凝集反應(yīng)
（1）玻片凝集反應(yīng)鑒定細(xì)菌
【材料】
１試劑：1∶10稀釋的傷寒桿菌診斷血清，傷寒桿菌、痢疾桿菌24小時瓊脂斜面培養(yǎng)物，生理鹽水。
２器材：玻璃蠟筆，載玻片，毛細(xì)吸管。
【方法】
１取清潔玻片一張，用蠟筆劃為三格，并注明號碼。無菌操作下，用接種環(huán)于1、2格內(nèi)加1∶10稀釋傷寒桿菌診斷血清1～2滴，第三格加1～2滴生理鹽水。
２無菌操作下，用接種環(huán)取傷寒桿菌培養(yǎng)物少許，混于第三格中，再混于*格中（不能先混于*格再混于第三格，因為這樣將使診斷血清混入鹽水而影響對照結(jié)果），將細(xì)菌與鹽水或血清混合均勻使呈乳狀液。此時取菌量不可過多，使懸液呈輕度乳濁即可。
３同法取痢疾桿菌培養(yǎng)物少許，于第二格內(nèi)混勻。
４輕輕搖動玻片，經(jīng)1～2分鐘后肉眼觀察，出現(xiàn)乳白色凝集塊者，即為陽性反應(yīng)；仍為乳濁液者，即為陰性反應(yīng)。
（2）玻片凝集反應(yīng)鑒定ＡＢＯ血型
ＡＢＯ血型系統(tǒng)可分為四種血型：Ａ型、Ｂ型、ＡＢ型和Ｏ型。ＡＢＯ血型系統(tǒng)中有Ａ、Ｂ兩種凝集原，紅細(xì)胞膜上含Ａ凝集原者稱為Ａ型血，含Ｂ凝集原者稱為Ｂ型血，同時含Ａ、Ｂ兩種凝集原者稱為ＡＢ型血，無Ａ、Ｂ凝集原者稱為Ｏ型血。同時，在人類血清中含有與上述凝集原相對應(yīng)的天然凝集素，即抗體。ＡＢＯ血型鑒定是用已知的標(biāo)準(zhǔn)Ａ型血清（含Ｂ凝集素）和Ｂ型血清（含Ａ凝集素），分別與被鑒定人的紅細(xì)胞相混合，依其發(fā)生凝集反應(yīng)的結(jié)果判定被鑒定人紅細(xì)胞表面所含的凝集原而確定的。在正常情況下，ＡＢＯ血型系統(tǒng)中只有相同血型的人才能進(jìn)行輸血，僅在無法得到同型血液的特殊情況下，才可考慮將Ｏ型血輸給其他血型的人，而且限定在300mL以內(nèi)，并且應(yīng)緩慢輸入。
【材料】
１試劑：標(biāo)準(zhǔn)Ａ血清，標(biāo)準(zhǔn)Ｂ血清，酒精棉球，無菌干棉球。
２器材：玻璃蠟筆，載玻片，采血針，毛細(xì)吸管。
【方法】
１取清潔玻片一張，用蠟筆劃為二格，注明號碼，并分別滴加標(biāo)準(zhǔn)Ａ血清和標(biāo)準(zhǔn)Ｂ血清各一滴。
２無菌操作下，用采血針收集受試者耳垂或指端外周血0.5～1mL。
３分別滴加受試者外周血一滴。
４輕輕搖動玻片，經(jīng)1～2分鐘后肉眼觀察。如兩者均凝集則為ＡＢ型血，均不凝集則為Ｏ型血，Ａ標(biāo)準(zhǔn)血清凝集而Ｂ標(biāo)準(zhǔn)血清不凝集則為Ａ型血，Ａ標(biāo)準(zhǔn)血清不凝集而Ｂ標(biāo)準(zhǔn)血清凝集則為Ｂ型血。
（3）試管凝集反應(yīng)
【材料】
１試劑：1∶10稀釋的傷寒診斷血清，菌液（傷寒桿菌“Ｈ"菌液，傷寒桿菌“Ｏ"菌液），生理鹽水。
２器材：試管架，小試管，吸管，玻璃蠟筆。
【方法】
１取潔凈小試管14只分兩排排列于試管架上，每排7只依次用蠟筆注明號碼，于每
管中分別加入0.5mL生理鹽水。

２在第1排第1管中加入1∶10稀釋傷寒桿菌“Ｈ"血清0.5mL，再加入生理鹽水0.5mL于管內(nèi),連續(xù)吹吸3次，使血清與鹽水充分混合，而后吸出0.5mL注入第2管，同樣再加入生理鹽水0.5mL于管內(nèi)予以混勻后吸出0.5mL注入第3管。依次類推，稀釋到第6管，自第6管吸出0.5mL棄去。此時，自第1管至第6管的血清稀釋倍數(shù)依次為1∶20，1∶40，1∶80，1∶160，1∶320，1∶640。第7管不加血清作為對照。
３同法用吸管吸取1∶10稀釋傷寒桿菌“Ｏ"血清加入第2排第1管，并依次如上法予以稀釋。
４用移液管吸取傷寒桿菌“Ｈ"菌液0.5mL分別加入第1排各管中，此時血清稀釋倍數(shù)又增加了一倍。
５同法于第2排各管中分別加入傷寒桿菌“Ｏ"菌液0.5mL。
６將各管振蕩混勻，放37℃水浴箱中2～4小時或37℃孵育箱中過夜次日取出觀察
結(jié)果。
【觀察結(jié)果】
１觀察之前切勿搖動試管，以免凝集塊分散。
２先觀察對照管，此管應(yīng)無凝集現(xiàn)象，管內(nèi)液體仍成混濁狀態(tài)。但如放置時間較長，細(xì)菌堆于管底成小圓點狀，為陰性反應(yīng)。
３試驗管應(yīng)自第１管觀察起，如有凝集時則于管底有不同大小的圓片狀邊緣不整齊的凝集物，上液則澄清透明或不同程度混濁。凝集的強弱可用“＋"號表示如下：
“＋＋＋＋"凝集很強，管內(nèi)液體*澄清，凝集塊*沉于管底；
“＋＋＋"凝集強，管內(nèi)液體不*澄清，稍有輕度混濁，凝集塊沉于管底；
“＋＋"凝集中等強度，液體半澄清，凝集塊沉于管底；
“＋"凝集弱，管內(nèi)液體混濁，少量凝集塊沉于管底；
“－"不凝集，管內(nèi)液體和對照管同樣混濁，無凝集塊。
４zui后輕輕振蕩各管，觀察凝集塊的狀態(tài)，對照管的細(xì)菌在振蕩時呈煙霧狀上升，隨即消散，細(xì)菌分散仍呈混濁狀態(tài)。“Ｈ"菌液的凝集塊疏松呈棉狀，大片沉于管底，輕搖即升起，并極易破碎?！埃?菌液凝集呈緊密顆粒狀，沉于管底堅實致密，輕輕振搖不易升起，凝集顆粒較小不易搖碎。
５記錄觀察的結(jié)果并判定凝集效價，通常以能產(chǎn)生明顯凝集（＋＋）的血清zui大稀釋倍數(shù)作為該血清的凝集效價。如血清的zui低稀釋度（即第1管1∶40）仍無凝集，應(yīng)報該血清效價低于1∶40。如血清的zui高稀釋度（即第6管1∶1280）仍顯*凝集現(xiàn)象，應(yīng)報該血清效價高于1∶1280。
（二）間接凝集抑制試驗
【原理及意義】
若使可溶性抗原與相應(yīng)抗體先充分反應(yīng)再加入有關(guān)的免疫微球，因抗體已被可溶性抗原結(jié)合，不再出現(xiàn)免疫微球的被動凝集現(xiàn)象，叫間接凝集抑制試驗，臨床化驗檢查中常用的免疫妊娠試驗就是一種間接凝集抑制試驗。
妊娠試驗：孕婦尿中絨毛膜促性腺激素（HCG）的含量比正常尿中的高。妊娠尿中加入抗絨毛膜促性腺激素抗體時，由于發(fā)生抗原抗體反應(yīng)的結(jié)果，抗體被消耗，此時再往尿中加入乳膠抗原（吸附有人類絨毛膜促性腺激素的乳膠顆粒），不再發(fā)生反應(yīng)，抗原仍呈乳狀液體，即為妊娠試驗陽性。反之，被檢尿中絨毛膜促性腺激素含量甚少（非妊娠尿）不足以把加入的抗體消耗，當(dāng)乳膠抗原加入后，抗體便與抗原結(jié)合發(fā)生反應(yīng)，出現(xiàn)均勻細(xì)小顆粒，妊娠試驗為陰性。
【材料】
１試劑：吸附有人類絨毛膜促性腺激素的乳膠抗原，抗人類絨毛膜促性腺激素抗體血清，孕婦尿，正常尿。
２器材：黑反應(yīng)板，玻璃蠟筆，滴管。
【方法】
１取清潔玻片一張，用蠟筆劃為二格，注明號碼，并分別滴加妊娠尿和正常尿各一滴。
２分別滴加含抗人類絨毛膜促性腺激素抗體血清各一滴，輕輕搖動，充分混勻。
３分別滴加一滴乳膠抗原，緩慢搖動3～5分鐘，觀察結(jié)果：不出現(xiàn)凝集者為陽性，其尿中含有HCG，表示妊娠；出現(xiàn)凝集者為陰性，其尿中不含有HCG，表示未妊娠。
【注意事項】
１試驗材料、用具使用前使其溫度接近室溫（20℃左右）。
２被檢尿太混濁，需要過濾。
３尿中有蛋白及血液時，不宜進(jìn)行此試驗。