總膽固醇（total cholesterol，TC）含量測定試劑盒說明書分光光度法   50管/48樣 
注意：正式測定之前選擇 2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。 
測定意義： 
TC包括游離膽固醇和膽固醇酯。TC 是指組織中所有脂蛋白所含膽固醇之總和。 
測定原理： 
利用酯酶催化膽固醇酯水解生成游離膽固醇（FC）和游離脂肪酸（FFA），從而把膽固醇酯
轉(zhuǎn)化為 FC；進(jìn)一步利用膽固醇氧化酶催化 FC 氧化，生成△4-膽甾烯酮和 H2O2；zui后利用
過氧化物酶催化H2O2氧化 4-氨基安替比林和酚，生成紅色醌類化合物；在500nm有特征吸
收峰，其顏色深淺與TC含量成正比。 
自備儀器和用品： 
可見分光光度計、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、1mL玻璃比色皿、異丙醇和蒸餾水。 
試劑組成和配制： 
試劑一：異丙醇50mL（自備）。 
TC工作液：液體50mL×1瓶，4℃保存。 
TC標(biāo)準(zhǔn)品：液體1mL×1支，5μmol/mL，4℃保存。 
TC的提取： 
1、 組織中TC 的提?。喊凑战M織質(zhì)量（g） ：試劑一體積(mL)為1：5~10 的比例（建議稱取
約 0.1g組織，加入 1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿，8000g 4℃離心10min，取上清，即 TC
待測液。 
2、細(xì)胞、細(xì)菌中 TC 的提取：先收集 400-500 萬細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi)，棄上清，加 1mL
試劑一，超聲波破碎 1min（強(qiáng)度20％，超聲2s，停1s） ，8000g 4℃離心10min，取上清，
即 TC 待測液。 
3、血清（漿）等樣品：直接測定。 
測定操作： 
1. 分光光度計預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長到500 nm，蒸餾水調(diào)零。 
2. TC工作液置于37℃水浴30min。 
3. 標(biāo)準(zhǔn)管：在1mL玻璃比色皿中依次加入 20 μL TC標(biāo)準(zhǔn)品和 980μLTC 工作液，迅速混勻，
5min后于500nm處比色，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。 
4. 測定管：在1mL玻璃比色皿中依次加入 20 μL TC待測液和 980μLTC 工作液，迅速混勻，
5min后于500nm處比色，記為A測定管。 
注意：標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。 
計算公式： 
1. 血清（漿）中TC 含量： 
TC（μ mol /dL）= C標(biāo)準(zhǔn)液×A測定管÷A標(biāo)準(zhǔn)管×100 mL 
= 500×A測定管÷A標(biāo)準(zhǔn)管 
C 標(biāo)準(zhǔn)液：5μmol/mL；100 mL：1dL=100 mL。 
2. 組織中TC 含量： 
(1)按樣本蛋白濃度計算 
TC（μ mol/mg prot）= C標(biāo)準(zhǔn)液×A測定管÷A標(biāo)準(zhǔn)管÷Cpr 
    = 5×A測定管÷A 標(biāo)準(zhǔn)管÷Cpr 
(2)按樣本質(zhì)量計算 
TC（μ mol / g）= C 標(biāo)準(zhǔn)液×A 測定管÷A 標(biāo)準(zhǔn)管÷W 
= 5×A 測定管÷A 標(biāo)準(zhǔn)管÷W 
C 標(biāo)準(zhǔn)液：5μmol/mL；樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g/mL 
3. 細(xì)胞、細(xì)菌中TC 含量： 
TC（μ mol /104
 cell）= C標(biāo)準(zhǔn)液×A測定管÷A標(biāo)準(zhǔn)管÷細(xì)菌或細(xì)胞（104
 cell /L） 
    = 5×A測定管÷A 標(biāo)準(zhǔn)管÷細(xì)菌或細(xì)胞（104
 cell /L） 
C 標(biāo)準(zhǔn)液：5μmol/mL。 
注意事項： 
zui低檢出限為1mmol/L。