使用說(shuō)明：

1. ABTS工作液的配制：

   (1) 參考下表，根據(jù)待測(cè)定樣品的數(shù)量(含標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn))配制適量的ABTS工作液：

      ABTS工作母液配制后，室溫避光存放12-16小時(shí)后方可使用。配制好的ABTS工作母液室溫避光存

      放，在2-3天內(nèi)穩(wěn)定。

      在使用前，把ABTS工作母液用PBS或80%乙醇稀釋成ABTS工作液，要求ABTS工作液的吸光度減去相

      應(yīng)的PBS或80%乙醇空白對(duì)照后，A734為0.7±0.05。當(dāng)待檢測(cè)樣品為水溶性樣品時(shí)，用PBS稀釋?zhuān)?/span>

      此時(shí)ABTS工作母液的稀釋倍數(shù)約為90-100倍；當(dāng)待檢測(cè)樣品為非水溶性樣品時(shí)，用80%乙醇稀釋?zhuān)?/span>

      此時(shí)ABTS工作母液的稀釋倍數(shù)約為100-110倍。

2. 待測(cè)樣品的準(zhǔn)備：

   (1) 血清、血漿、唾液或尿液樣品的準(zhǔn)備：

       血清、血漿、唾液或尿液樣品每個(gè)樣品需要10微升，都可以直接用于測(cè)定。血清、血漿、唾液或

       尿液樣品都可以使用新鮮樣品進(jìn)行測(cè)定，也可以-80℃凍存后再進(jìn)行測(cè)定。-80℃凍存的樣品至少

       在一個(gè)月內(nèi)所測(cè)定獲得的數(shù)據(jù)沒(méi)有顯著變化。注意：血漿制備時(shí)可以使用肝素或檸檬酸鈉抗

       凝，不宜使用EDTA抗凝。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，人血清或血漿中的總抗氧化能力為0.5-2mM，人唾液中

       的總抗氧化能力為0.3-1mM，人尿液中的總抗氧化能力為0.2-3mM。

   (2) 細(xì)胞或組織樣品的準(zhǔn)備：

       對(duì)于細(xì)胞樣品，收集約100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞(不必計(jì)數(shù)，直接刮下，不宜使用胰酶和EDTA消化)，放

       置在200微升冰冷的PBS或HBSS溶液中，勻漿或超聲以充分破碎細(xì)胞并釋放其中的抗氧化物，4℃ 

       約12000g離心5分鐘，取上清用于后續(xù)測(cè)定。對(duì)于組織樣品，每20mg組織加入100微升冰冷的PBS

       或HBSS溶液，勻漿或超聲以充分破碎組織并釋放其中的抗氧化物，4℃ 約12000g離心5分鐘，取

       上清用于后續(xù)測(cè)定。以上所有操作均需在4℃或冰上操作。制備好的細(xì)胞或組織樣品的上清如果

       不立即用于測(cè)定，可以在-80℃凍存。-80℃凍存的樣品至少在一個(gè)月內(nèi)所測(cè)定獲得的數(shù)據(jù)沒(méi)有顯

       著變化。細(xì)胞或組織樣品在測(cè)定總抗氧化能力時(shí)需同時(shí)測(cè)定蛋白濃度，zui后測(cè)定獲得的總抗氧化

       能力通常表示為每毫克或每克蛋白重量中的總抗氧化能力，表示單位為mmol/mg或mmol/g。

   (3) 其它樣品的準(zhǔn)備：

       植物或中草藥抽提液都可以直接用于檢測(cè)。需注意樣品本身的顏色不會(huì)干擾檢測(cè)。植物或中草藥

       抽提液的抗氧化能力可以表示為每毫克或每克抽提物干重中的總抗氧化能力，表示單位為

       mmol/mg或mmol/g。各種抗氧化物測(cè)定其抗氧化能力時(shí)，通常配制成0.15-1.5mM，然后進(jìn)行測(cè)

       定。抗氧化物的濃度可以以摩爾濃度表示時(shí)，測(cè)定獲得的總抗氧化能力可以用相對(duì)總抗氧化能力

       進(jìn)行表示，例如0.5mM的某抗氧化物其測(cè)定獲得的OD值和1mM的Trolox測(cè)定獲得的OD值相同，則其

       相對(duì)總抗氧化能力為2，再如0.2mM的某抗氧化物其測(cè)定獲得的OD值和1mM的Trolox測(cè)定獲得的OD

       值相同，則其相對(duì)總抗氧化能力為5。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道和實(shí)際測(cè)定結(jié)果，維生素C的抗氧化能力為

       1.0，維生素E的抗氧化能力為1.0，GSH的抗氧化能力為1.3，Uric acid的抗氧化能力為1.0，

       β-Carotene的抗氧化能力為2.6，Lycopene的抗氧化能力為3.1，Quercetin的抗氧化能力為

       3.0，鮮橙汁的總抗氧化能力為2.2。

3. 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)測(cè)定的準(zhǔn)備：

        用蒸餾水或樣品配制溶液稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。對(duì)于血清、血漿、唾液或尿液樣品直接用蒸餾水或

        PBS稀釋標(biāo)準(zhǔn)品，對(duì)于細(xì)胞或組織樣品，用用于細(xì)胞或組織勻漿的溶液稀釋標(biāo)準(zhǔn)品，其它樣

       品則用樣品配制溶液對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行稀釋?zhuān)蜻x擇PBS或80%乙醇來(lái)稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。把10mM Trolox

        標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋成0.15、0.3、0.6、0.9、1.2和1.5mM。

4. 總抗氧化能力的測(cè)定：

   (1) 96孔板的每個(gè)檢測(cè)孔中加入200微升ABTS工作液。

   (2) 空白對(duì)照孔中加入10微升蒸餾水或PBS等適當(dāng)溶液；標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)檢測(cè)孔內(nèi)加入10微升各種濃度的

       Trolox標(biāo)準(zhǔn)溶液；樣品檢測(cè)孔內(nèi)加入10微升各種樣品。輕輕混勻。

   (3) 室溫孵育2-6分鐘后測(cè)定A734。如果測(cè)定A734有困難，也可以在725-745nm范圍內(nèi)進(jìn)行測(cè)定。

   (4) 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算出樣品的總抗氧化能力。如果樣品測(cè)定出來(lái)的吸光度在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)范圍以外，

       需把樣品適當(dāng)稀釋或濃縮后再進(jìn)行測(cè)定。

   (5) 總抗氧化能力的表示方式：

       在采用Trolox作為標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行總抗氧化能力檢測(cè)時(shí)，樣品的抗氧化能力可以用Trolox-

       Equivalent Antioxidant Capacity (TEAC)來(lái)表示。對(duì)于混合物例如血漿、血清、唾液或尿

       液等的抗氧化能力，可以直接用Trolox的摩爾濃度來(lái)表示，例如某樣品測(cè)定獲得的抑制率和

       0.6mM的Trolox相同，則該樣品的總抗氧化能力為0.6mM；再如某樣品稀釋5倍后測(cè)定獲得的抑

       制率和0.5mM的Trolox相同，則該樣品的總抗氧化能力為2.5mM。對(duì)于細(xì)胞或組織裂解液等，例

       如某裂解液樣品的蛋白濃度為0.15mg/ml，測(cè)定獲得的抑制率和0.3mM Trolox相同，則該裂解液

       樣品的總抗氧化能力為0.3mM/0.15mg/ml，即為2mmol/g。對(duì)于植物或中草藥抽提物，例如某樣

       品的濃度為0.1mg/ml，測(cè)定獲得的抑制率和0.5mM Trolox相同，則該樣品的總抗氧化能力為

       0.5mM/0.1mg/ml，即為5mmol/g。對(duì)于純的化合物例如維生素C、GSH等，例如使用1mM某樣品檢

       測(cè)時(shí)的抑制率相當(dāng)于1.5mM Trolox時(shí)，該樣品的抗氧化能力為1.5mM，再如使用0.5mM某樣品檢

       測(cè)的抑制率相當(dāng)于0.8mM Trolox時(shí)，該樣品的抗氧化能力為1.6mM。