GREENspin全血RNA快速提取試劑盒01
■ 適用范圍：
適用于快速提取全血總RNA
本試劑盒在室溫儲(chǔ)存12個(gè)月不影響使用效果。
試劑盒組成 保存 50次 100次
10X紅細(xì)胞裂解液RLB 室溫 25 ml 50ml
裂解液RLT 室溫 50 ml 50 ml×2
去蛋白液RW1 室溫 40 ml 80ml
漂洗液RW 室溫 15ml                   15ml×2
*次使用前按說明加量乙醇
RNase-free H2O 室溫 10 ml 20ml
70%乙醇 室溫 9ml                   18ml 
*次使用前按說明加量乙醇 
RNase-free
吸附柱RA和收集管 室溫 50套 100套
GREENspin全血RNA快速提取試劑盒
■ 試劑盒組成、儲(chǔ)存、穩(wěn)定性：
02
■ 儲(chǔ)存事項(xiàng)：
1.  所有的溶液應(yīng)該是澄清的，如果環(huán)境溫度低時(shí)溶液可能形成沉淀，此時(shí)不應(yīng)該
直接使用，可在37℃水浴加熱幾分鐘，即可恢復(fù)澄清。
2.  不合適的儲(chǔ)存于低溫（4℃或者－20℃）會(huì)造成溶液沉淀，影響使用效果，因
此運(yùn)輸和儲(chǔ)存均在室溫下（15℃－25℃）進(jìn)行。
3.  避免試劑長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、PH值變化，各溶液使用后應(yīng)
及時(shí)蓋緊蓋子。
■ 產(chǎn)品介紹：
紅細(xì)胞裂解液選擇性裂解紅細(xì)胞,然后*的裂解液/β-巰基乙醇迅速裂解白細(xì)胞和
滅活細(xì)胞RNA酶，然后用乙醇調(diào)節(jié)結(jié)合條件后,RNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離
心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜， 再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟, 去蛋白液和漂洗液將細(xì)胞代
謝物，蛋白等雜質(zhì)去除， zui后低鹽的RNase free H20將純凈RNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。
■ 產(chǎn)品特點(diǎn)：
1.  離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口世界公司特制吸附膜，柱與柱之間
吸附量差異極小，可重復(fù)性好。克服了國(guó)產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。
2.  不需要使用有毒的苯酚,氯仿等試劑，也不需要乙醇沉淀等步驟。
3.  反復(fù)優(yōu)化的紅細(xì)胞裂解液配方,裂解效果快速*。
4.  快速，簡(jiǎn)捷，單個(gè)樣品操作一般可在40分鐘內(nèi)完成。
5.  多次柱漂洗確保高純度，OD260/OD280典型的比值達(dá)1.9～2.0，基本無
DNA殘留,可用于RT-PCR，Northern-blot和各種實(shí)驗(yàn)。
目錄編號(hào)  包裝單位
01 50次
02 100次03 04
■ 注意事項(xiàng)：
1.  *次使用前請(qǐng)先在漂洗液RW瓶和70%乙醇瓶中加入量乙醇，加入后請(qǐng)
及時(shí)打鉤標(biāo)記已加入乙醇，以免多次加入!
2.  所有的離心步驟均在室溫完成，使用轉(zhuǎn)速可以達(dá)到13，000 rpm的傳統(tǒng)臺(tái)式離
心機(jī)，如Eppendorf 5415C 或者類似離心機(jī)。
3.  需要自備乙醇, β-巰基乙醇,一次性注射器,研缽。
4.  裂解液RLT 和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作時(shí)要戴乳膠手套，避免
沾染皮膚，眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時(shí)，要用大量清水或者生理鹽水沖洗。
5.  預(yù)防RNase 污染，應(yīng)注意以下幾方面：
1)  經(jīng)常更換新手套。因?yàn)槠つw經(jīng)常帶有細(xì)菌，可能導(dǎo)致RNase 污染。
2)  使用無RNase 的塑料制品和槍頭避免交叉污染。
3)  RNA 在裂解液RLT 中時(shí)不會(huì)被RNase 降解。但提取后繼續(xù)處理過程中應(yīng)使用
不含RNase 的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4 小時(shí)，塑料器皿可在0.5 M 
NaOH 中浸泡10 分鐘，然后用水*清洗，再滅菌，即可去除RNase。
4)  配制溶液應(yīng)使用無RNase 的水。（將水加入到干凈的玻璃瓶中，加入DEPC至
終濃度0.1%( v/v)，37℃放置過夜，高壓滅菌。）
6.  關(guān)于DNA 的微量殘留：
一般說來任何總RNA提取試劑在提取過程中無法*避免DNA的微量殘留,本公司
的GREENspin系列RNA提取產(chǎn)品，由于采取了本公司*的緩沖體系和選擇了特殊吸
附能力的吸附膜，在大多數(shù)RT-PCR 擴(kuò)增過程中極其微量的DNA殘留（一般電泳EB染
色紫外燈下觀察不可見）影響不是很大, 如果要進(jìn)行嚴(yán)格的mRNA表達(dá)量分析如熒光定
量PCR,我們建議在進(jìn)行模板和引物的選擇時(shí)：
1)  選用跨內(nèi)含子的引物,以穿過mRNA中的連接區(qū),這樣DNA就不能作為模板參與
擴(kuò)增反應(yīng)。
2)  選擇基因組DNA和cDNA上擴(kuò)增的產(chǎn)物大小不一樣的引物對(duì)。
3)  將RNA提取物用RNase-free的DNase I 處理。本試劑盒還可以用于DNase I處
理后的RNA清潔(cleanup),請(qǐng)索取具體操作說明書。
4)  在步驟去蛋白液RW1漂洗前，直接在吸附柱RA上進(jìn)行DNase  I處理。請(qǐng)
我們索取具體操作說明書。
7.  RNA 純度及濃度檢測(cè)：
完整性： RNA 可用普通瓊脂糖凝膠電泳  (電泳條件：膠濃度1.2%；0.5×TBE電泳
緩沖液；150v，15 分鐘)檢測(cè)完整性。由于細(xì)胞中70%-80%的RNA 為rRNA，電泳后
UV 下應(yīng)能看到非常明顯的rRNA 條帶。動(dòng)物rRNA 大小分別約為5 kb 和2kb，分別相
當(dāng)于28S 和18S  rRNA。動(dòng)物RNA 樣品中zui大rRNA 亮度應(yīng)為次大rRNA亮度的1.5-2.0 
倍，否則表示RNA 樣品的降解。出現(xiàn)彌散片狀或條帶消失表明樣品嚴(yán)重降解。
純度：OD260/OD280 比值是衡量蛋白質(zhì)污染程度的指標(biāo)。高質(zhì)量的RNA，
OD260/OD280 讀數(shù)（10mMTris, pH7.5）在1.8-2.1 之間。OD260/OD280 讀數(shù)受
測(cè)定所用溶液的pH 值影響。同一個(gè)RNA 樣品，假定在10mM Tris，pH7.5 溶液中測(cè)出
的OD260/OD280 讀數(shù)1.8-2.1 之間，在水溶液中所測(cè)讀數(shù)則可能在1.5-1.9 之間，但
這并不表示RNA 不純。
濃度：取一定量的 RNA 提取物，用RNase-free 水稀釋n 倍，用RNase-free水將
分光光度計(jì)調(diào)零，取稀釋液進(jìn)行OD260, OD280 測(cè)定，按照以下公式進(jìn)行RNA濃度的
計(jì)算：終濃度（ng/μl）= (OD260)×(稀釋倍數(shù)n)×4005 06
GREENspin全血RNA快速提取試劑盒
■ 操作步驟：（實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)先閱讀注意事項(xiàng)）
提示：
→  *次使用前請(qǐng)先在漂洗液RW瓶和70%乙醇瓶中加入量無水乙醇!
→  使用前將10X紅細(xì)胞裂解液RLB用DEPC處理水稀釋到1X。
→  操作前在裂解液RLT中加入β-巰基乙醇至終濃度1%，如1 ml RLT 中加入10μl 
β-巰基乙醇。此裂解液現(xiàn)用現(xiàn)配。配好的RLT 4℃可放置一個(gè)月。
1.  在適合大小的RNase  free離心管中加入1體積（<1.5 ml）加入各種抗凝劑新
鮮血液 (顛倒混勻后)和3體積的紅細(xì)胞裂解液RLB,顛倒混勻,可輕彈管壁,確?；靹?。
2.  室溫放置10分鐘（期間應(yīng)該顛倒輕彈混勻數(shù)次幫助裂解紅細(xì)胞）。
如果RNA降解嚴(yán)重,可在冰上裂解,但是時(shí)間可長(zhǎng)一些以充分裂解。
3.  12,000  rpm離心20秒，倒棄紅色上清，并小心的盡可能多的吸棄上清（注意
不要吸到管底的細(xì)胞團(tuán)），留下完整的管底白細(xì)胞團(tuán)。 
離心后在管底應(yīng)該見到白色的白細(xì)胞團(tuán)，也可能有一些紅細(xì)胞殘片和白細(xì)胞團(tuán)在一
起，但是如果看到的是大部分的紅色細(xì)胞團(tuán)，說明紅細(xì)胞裂解很不充分，應(yīng)該再加入紅
細(xì)胞裂解液重懸細(xì)胞團(tuán)后重復(fù)步驟2，3。
上清盡可能的吸棄,殘留過多會(huì)稀釋裂解液,造成裂解結(jié)合異常,產(chǎn)量純度降低。
4.  渦旋或者輕彈管壁將白細(xì)胞沉淀*松散重懸，加入350μl（<0.5 ml全血）或
者600μl（0.5-1.5ml全血）裂解液RLT，吹打混勻后用手劇烈振蕩20秒，充分裂解。病
人血樣中白細(xì)胞數(shù)量可能大幅增加,應(yīng)該適當(dāng)減少處理量?；蛘甙凑?50μl（<2x106白
細(xì)胞）或者600μl（2x106-1x107白細(xì)胞）比例加RTL。
5.  用帶鈍針頭的一次性 1 ml(配0.9mm針頭) 注射器抽打裂解物 5-10 次或直到
得到滿意勻漿結(jié)果(或者電動(dòng)勻漿30秒),可以剪切DNA,降低粘稠度和提高產(chǎn)量。
6.  較估計(jì)裂解物體積,加入等體積的70%乙醇（請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙
醇!）,此時(shí)可能出現(xiàn)沉淀,但是不影響提取過程,立即吹打混勻,不要離心。
7.  將混合物(每次小于700μl,多可以分兩次加入)加入一個(gè)吸附柱RA中，（吸附柱
放入收集管中）13,000 rpm離心30-60秒，棄掉廢液。
8.  加700μl 去蛋白液RW1，室溫放置30秒，12，000rpm 離心30秒，棄掉廢液。
如果DNA殘留明顯,可在加入RW1后室溫放置5分鐘再離心。
9.  加入500μl漂洗液RW（請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇!），12,000  rpm 離心
30秒，棄掉廢液。加入500μl漂洗液RW,重復(fù)一遍。
10. 將吸附柱RA放回空收集管中，13,000  rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液, 以免
漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。
11. 取出吸附柱RA，放入一個(gè)RNase  free離心管中，根據(jù)預(yù)期RNA產(chǎn)量在吸附膜
的中間部位加40-60μl RNase  free water（事先在 70-80℃水浴中加熱效果更好）， 
室溫放置1分鐘，12,000 rpm 離心1分鐘。
12. 如果提取全血>0.5 ml或者>2x106白細(xì)胞,加40-60μl RNase  free water重復(fù)
步驟11,合并兩次洗脫液,或者使用*次的洗脫液加回到吸附柱重復(fù)步驟一遍(如果需要
RNA濃度高)。
洗脫兩遍的RNA洗脫液濃度高,分兩次洗脫合并洗脫液的RNA產(chǎn)量比前者高15–
30%,但是濃度要低,用戶根據(jù)需要選擇。