安普霉素（Apramycin）殘留定量試劑盒本試劑盒僅供研究使用。 
1  使用目的 使用目的 使用目的 使用目的： ：： ： 
本試劑盒用于飼料、魚(yú)、蝦和肉類組織（如雞、牛肉和豬肉），雞蛋、蜂蜜、牛奶、血
清和尿樣中安普霉素（Apramycin）殘留的定量檢測(cè)。 
2  實(shí)驗(yàn)原理 實(shí)驗(yàn)原理 實(shí)驗(yàn)原理 實(shí)驗(yàn)原理 
本試劑盒采用直接競(jìng)爭(zhēng)ELISA 方法，在微孔板包被有安普霉素 （Apramycin）偶聯(lián)抗原，
加入安普霉素（Apramycin）標(biāo)準(zhǔn)品或樣品，游離安普霉素（Apramycin）與微孔條上預(yù)包被
的安普霉素（Apramycin）偶聯(lián)抗原互相競(jìng)爭(zhēng)抗安普霉素（Apramycin）抗體酶標(biāo)記物，用
TMB底物顯色，加入終止液后顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色，用酶標(biāo)儀在 450nm波長(zhǎng)下進(jìn)行檢測(cè)，
吸光值與樣品中安普霉素（Apramycin）含量成反比，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中安普霉素
（Apramycin）的含量。     
安普霉素（Apramycin）殘留定量試劑盒3  試劑盒組成 試劑盒組成 試劑盒組成 試劑盒組成   
3.1  預(yù)包被的安普霉素（Apramycin）偶聯(lián)抗原的可拆酶標(biāo)板：1 塊（12孔×8條）。 
3.2  安普霉素 （Apramycin）標(biāo)準(zhǔn)品： 6 瓶（1ml/瓶）， 含量分別是： 0 ppb， 0.05 ppb,0.15ppb,0.45 
ppb,1.35ppb,4.05 ppb 
3.3 抗安普霉素（Apramycin）抗體酶結(jié)合物：1 瓶（6ml）。 
3.4 顯色液A：1瓶（6ml）。 
3.5 顯色液B：1 瓶（6ml）。 
3.6 終止液：1瓶（6ml），2M硫酸。 
3.7 樣本稀釋液：1瓶（10×,    6ml），用于樣品稀釋用。 
3.8 濃縮洗滌液：1瓶（20×，20ml），用于洗板。 
3.9 說(shuō)明書(shū)一份。 
4  需要而未提供的材料 需要而未提供的材料 需要而未提供的材料 需要而未提供的材料 
4.1  設(shè)備 
4.1.1波長(zhǎng)450nm酶標(biāo)儀。   
4.1.2粉碎機(jī)。 
4.1.3量筒。 
4.1.4振蕩器。 
4.1.5漏斗。 
4.1.6Whatman 或相當(dāng)?shù)臑V紙。 
4.1.7微量移液器。 
4.2  試劑 
4.2.1去離子水或蒸餾水。 
4.2.2 甲醇。 
5  貯存 貯存 貯存 貯存 
5.1  試劑盒貯存于2~8℃，切勿冷凍 
5.2  未用完的微孔板應(yīng)該密封干燥保存 
6  注意事項(xiàng) 注意事項(xiàng) 注意事項(xiàng) 注意事項(xiàng)  
  2 
6.1  使用試劑盒前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)。 
6.2  不要使用過(guò)期試劑盒。 
6.3  試劑盒使用前，將試劑恢復(fù)至室溫（25±2℃），建議至少回溫2小時(shí)。 
6.4  標(biāo)準(zhǔn)品中含有安普霉素（Apramycin），使用時(shí)應(yīng)特別注意，操作時(shí)應(yīng)帶手套。 
6.5  終止液中含有硫酸，使用時(shí)防止灼傷皮膚及腐蝕衣物。 
6.6  不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所用吸頭不能混用，否則會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果。 
6.7  不同批號(hào)試劑盒中的試劑不得混用；不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所用吸頭不得混用，否則會(huì)影響
實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 
6.8  稀釋樣本時(shí)必須用本試劑盒中的樣本稀釋液，否則會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果 
6.9  混合試劑時(shí)應(yīng)避免起泡。 
7  工作液準(zhǔn)備 工作液準(zhǔn)備 工作液準(zhǔn)備 工作液準(zhǔn)備 
7.1  安普霉素（Apramycin）標(biāo)準(zhǔn)品溶液：0 ppb，0.05 ppb,0.15ppb,0.45 ppb,1.35ppb,4.05 ppb 
7.2  濃縮洗滌液：用蒸餾水按1:20(1+19)稀釋備用 
7.3  樣本稀釋液：備用 
7.3  顯色劑：已備用，避免光線直照 
7.4  反應(yīng)終止液：已備用 
8  樣品處理程序 樣品處理程序 樣品處理程序 樣品處理程序（樣品在提取過(guò)程中，要嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)操作，提取過(guò)程中應(yīng)準(zhǔn)確稀釋，否則
會(huì)出現(xiàn)結(jié)果不準(zhǔn)確，樣品應(yīng)當(dāng)保存在陰涼避光之處及冷藏保存） 
8.1取10g粉碎的樣品，加  20ml 70%甲醇溶液 
8.2強(qiáng)力振蕩3分鐘 
8.3用Whatman 濾紙過(guò)濾 
8.4取25µl處理后的樣品，加入25µl樣本稀釋液于反應(yīng)孔中（樣本稀釋倍數(shù)為2） 
9  酶免分析步驟 酶免分析步驟 酶免分析步驟 酶免分析步驟 
9.1  實(shí)驗(yàn)須知 
9.1.1 實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前請(qǐng)將所有試劑于盒外充分恢復(fù)至室溫（25±2℃），時(shí)間約2小時(shí)。回溫至室
溫（25±2℃）后再取出微孔條，多余的微孔條重新密封立即于2~8℃干燥保存 
注：一定保證回溫充分，否則影響檢測(cè)的度和準(zhǔn)確度。 
9.1.2 使用后請(qǐng)立即將試劑放回2~8℃保存 
9.1.3 請(qǐng)不要改變分析程序 
9.1.4 請(qǐng)使用的微量移液器 
9.1.5 操作一旦開(kāi)始，請(qǐng)不要中斷任何程序 
9.1.6 ELISA結(jié)果的可重復(fù)性極大程度的取決于操作程序，請(qǐng)嚴(yán)格按照要求操作 
9.1.7 為避免交叉污染，每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品均應(yīng)使用不同的吸頭加樣 
9.1.8 加樣時(shí)請(qǐng)勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內(nèi)表面 
9.2  分析步驟 
9.2.1 預(yù)行編號(hào)，標(biāo)記B0、標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的位置，進(jìn)行雙孔檢測(cè) 
9.2.2 取所需數(shù)量的微孔（微孔條可拆），將多余板條重新密封并立即放回2~8℃保存 
9.2.3 樣品稀釋液（10×）、濃縮洗滌液（10×）稀釋成工作液(蒸餾水或去離子水稀釋) 
9.2.4 在B0孔中加入50µl0.0 ng/ ml標(biāo)準(zhǔn)品溶液 
9.2.5 在各標(biāo)準(zhǔn)孔中加入500l的標(biāo)準(zhǔn)品溶液 
9.2.6 在各樣品孔中加入50µl樣品溶液 
9.2.7 在所有孔中加入50µl的抗安普霉素（Apramycin）抗體酶結(jié)合物 
9.2.8 輕輕晃動(dòng)反應(yīng)板幾秒鐘。   
9.3 37℃溫浴30min （溫浴過(guò)程中不時(shí)輕拍反應(yīng)板，可以減少雙孔誤差）  
  3 
9.3.1 甩掉孔中液體，用洗液洗滌微孔板5次，zui后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以*除去孔中液
體。 
9.4  反應(yīng) 
9.4.1  洗滌程序完成后，立即用微量移液器在每個(gè)微孔中先加入50µl顯色液A，再加  50µl顯
色液B；輕微晃動(dòng)反應(yīng)板使之*混勻 
9.4.2 37℃溫浴10min 
9.4.3 每孔中加入50µl終止液，混勻 
9.4.4 在450nm下檢測(cè)吸光度，結(jié)果在5min內(nèi)讀取。 
10  結(jié)果計(jì)算 結(jié)果計(jì)算 結(jié)果計(jì)算 結(jié)果計(jì)算 
10.1定量分析 
10.1.1所獲得的每個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣本吸光度值的平均值（B）除以*個(gè)標(biāo)準(zhǔn)（0標(biāo)準(zhǔn)）
的吸光度值（B0）再乘以99%，即百分吸光度值。 
B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值 
B0—0µg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值 
10.1.2以安普霉素（Apramycin）濃度的對(duì)數(shù)值為X軸，百分吸光度值為Y軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線
圖。根據(jù)樣品百分吸光度值，可從曲線上得到對(duì)應(yīng)點(diǎn)的橫坐標(biāo)，即為安普霉素（Apramycin）
濃度的對(duì)數(shù)值，求得反對(duì)數(shù)即為測(cè)定液中安普霉素（Apramycin）濃度C（ppb） 
10.1.3由于樣品經(jīng)過(guò)了預(yù)先稀釋，因此根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋
倍數(shù)。   
10.2 半定量測(cè)定 
10.1.1目測(cè)半定量測(cè)定：首先選擇一個(gè)適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運(yùn)行，根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品吸光
度值的高低比較，判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值。 
10.1.2儀器半定量測(cè)定：首先選擇一個(gè)適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運(yùn)行，根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品顏色
深淺比較，判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值。 
11  特異性 特異性 特異性 特異性 
物質(zhì) 交叉反應(yīng) 
安普霉素（Apramycin）  99% 
安普霉素（Apramycin）殘留定量試劑盒 
12  試劑盒參數(shù) 試劑盒參數(shù) 試劑盒參數(shù) 試劑盒參數(shù) 
本試劑盒檢測(cè)下限為0.01μg/ml 
B0吸光度值應(yīng)大于1.0 
試劑盒吸光度板內(nèi)誤差小于8％，板間誤差小于15％。 
用本說(shuō)明書(shū)提供的組織樣本提取方法回收率大于80％。 
13 
試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍為0.05ppb~4.05ppb。 
 
14  分析限制 分析限制 分析限制 分析限制 
本試劑盒檢測(cè)為陽(yáng)性的樣品應(yīng)該用另一種方法如HPLC或GC/MS加以確證。 
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