豬腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA 試劑盒提供免費代測的服務：(您只需把標本寄過來，我們?yōu)槟?jié)省時間，幫您出結果，原始數(shù)據，分析數(shù)據均可提供，實驗時間五個工作日給您結果。)
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FOR RESEARCH USE ONLY

Drug Names豬腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA 試劑盒

Generic Name：

  This kit can be used for determination of serum, plasma and liquid samples Organization Content.

The experimental principle:

The product levels were measured in samples of the kit by double antibody sandwichmethod. The product with the purified antibody coated microtiter plate, made of solid phase antibody, to package is the product antigen monoclonal antibodies are then added to the micropores, the product and then with HRP labeled antibody binding, the formation of antibody - antigen - antibody complex enzyme label, after thorough washing with TMB chromogenic substrate. TMB in the HRP enzyme catalytic conversion into the blue, and in the action of acid into the final yellow. This product is positively related to the depth of color and in the samples. Instrument measured absorbance in the 450nm wavelength with ELISA (OD), the product concentration in the samples was calculated by standard curve.

豬腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA 試劑盒

Materials provided with the kit

Specimen requirements

• serum- coagulation at room temperature 10-20 mins，centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.
• plasma-use suited EDTA or citrate plasma as an anticoagulant,mix 10-20 mins ,centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.
• Urine-collect sue a sterile container, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again. The Operation of Hydrothorax and cerebrospinal fluid Reference to it.
• cell culture supernatant-detect secretory components, collect sue a sterile container, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant,detect the composition of cells, Dilut cell suspension with PBS（PH7.2-7.4）, Cell concentration reached 1 million / ml, repeated freeze-thaw cycles, damage cells and release of intracellular components, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.
• Tissue samples- After cutting samples, check the weight,add PBS（PH7.2-7.4）, Rapidly frozen with liquid nitrogen, maintain samples at 2-8℃ after melting,add PBS（PH7.4）, Homogenized by hand or Grinders, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant.
• extract as soon as possible after Specimen collection,and according to the relevant literature, and should be experiment as soon as possible after the extraction. If it can’t, specimen can be kept in -20 ℃ to preserve, Avoid repeated freeze-thaw cycles.
• Can’t detect the sample which contain NaN3, because NaN3 inhibits HRP active.

Assay procedure

1.Dilute and add sample to Standard: set 10 Standard wells on the ELISA plates coated, add Standard 100μl to the first and the second well, then add Standard dilution 50μl to the first and the second well, mix; take out 100μl form the first and the second well then add it to the third and the forth well separay. then add Standard dilution 50μl to the third and the forth well ,mix ; then take out 50μl from the third and the forth well discard, add 50μl to the fifth and the sixth well ,then add Standard dilution 50μl to the fifth and the sixth well, mix ; take out 50μl from the fifth and the sixth well and add to the seventh and the eighth well, then add Standard dilution 50μl to the seventh and the eighth well ,mix ; take out 50μl from the seventh and the eighth well and add to the ninth and the tenth well, add Standard dilution 50μl to the ninth and the tenth well, mix , take out 50μl from the ninth and the tenth well discard(add Sample 50μl to each well after Diluting ,(density: 240ng/L,160ng/L ,80ng/L,40ng/L, 20ng/L)

2.add sample：Set blank wells separay (blank comparison wells don’t add sample and HRP-Conjugate reagent, other each step operation is same). testing sample well. add Sample dilution 40μl to testing sample well, then add testing sample 10μl (sample final dilution is 5-fold), add sample to wells , don’t touch the well wall as far as possible, and Gently mix.

3.Incubate: After closing plate with Closure plate membrane ,incubate for 30 min at 37℃.

4.Configurate liquid: 30-fold (or 20-fold)wash solution diluted 30-fold (or 20-fold) with distilled water and reserve.

5.washing：Uncover Closure plate membrane, discard Liquid, dry by swing, add washing buffer to every well, still for 30s then drain, repeat 5 times, dry by pat.

6.add enzyme：Add HRP-Conjugate reagent 50μl to each well, except  blank well. 

7.incubate：Operation with 3.

8.washing：Operation with 5.

9.color：Add Chromogen Solution A 50ul and Chromogen Solution B to each well, evade the light preservation for 15 min at 37℃

10.Stop the reaction：Add Stop Solution50μl to each well, Stop the reaction(the blue color change to yellow color).

11.assay：take blank well as zero , Read absorbance at 450nm after Adding Stop Solution and within 15min.

豬腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA 試劑盒Important notes

• The kit takes out from the refrigeration environment should be balanced 15-30 minutes in the room temperature, ELISA plates coated if has not use up after opened, the plate should be stored in Sealed bag.
• washing buffer will Crystallization separation, it can be heated the water helps dissolve when dilute . Washing does not affect the result.
• add Sample with sampler Each step, And proofread its accuracy frequently, avoids the experimental error. add sample within 5 mins, if the number of sample is much , recommend to use Volley .
• if the testing material content is excessively higher (The sample OD is bigger than the first standard well ),please dilute Sample (n-fold), Please diluente and multiplied by the dilution factor.（×n×5）.
• Closure plate membrane only limits the disposable use, to avoid cross-contamination.
• The substrate evade the light preservation.
• Please according to use instruction strictly, The test result determination must take the microtiter plate reader as a standard.
• All samples, washing buffer and each kind of reject should according to infective material process.
• Do not mix reagents with those from other lots.

豬腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA 試劑盒Calculate：

Take the standard density as the horizontal, the OD value for the vertical ,draw the standard curve on graph paper, Find out the corresponding density according to the sample OD value by the Sample curve, multiplied by the dilution multiple, or calculate the straight line regression equation of the standard curve with the standard density and the OD value ,with the sample OD value in the equation, calculate the sample density, multiplied by the dilution factor, the result is the sample actual density.

豬腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA 試劑盒Storage and validity

1．Storage：  2-8℃.

2．validity： six months.

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HOPC-f80        Human Oligodendrocyte Precursor Cells-fresh     80 x 10^6 cells/tube
HOPC-f20        Human Oligodendrocyte Precursor Cells-fresh     20 x 10^6 cells/tube
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HRA    人類視網膜星形膠質細胞    Human Retinal Astrocytes    5 x 10^5 cells/vial 
HM    人小神經膠質細胞    Human Microglia    5 x 10^5 cells/vial
            
    真皮細胞系統(tǒng)        
HDMEC    人真皮微血管內皮細胞    Human Dermal Microvascular Endothelial Cells    5 x 10^5 cells/vial
HDLEC    人真皮淋巴管內皮細胞    Human Dermal Lymphatic Endothelial Cells    5 x 10^5 cells/vial
HDMEC-a    人真皮微血管內皮細胞-成人    Human Dermal Microvascular Endothelial Cells-adult    5 x 10^5 cells/vial
HDVSMC    "人真皮血管平滑肌細胞-新生兒

"    Human Dermal Vascular Smooth Muscle Cells-neonate    5 x 10^5 cells/vial
HEK-n    人表皮角質細胞--新生    Human Epidermal Keratinocytes-neonatal    5 x 10^5 cells/vial
HEK-a    人表皮角質細胞--成人    Human Epidermal Keratinocytes-adult    5 x 10^5 cells/vial
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HEM-d    人表皮黑色素細胞--深色素    Human Epidermal Melanocytes-dark    5 x 10^5 cells/vial
HM    人黑色素細胞--成人    Human Melanocytes-adult    5 x 10^5 cells/vial
HEM-f    人黑色素細胞--胎兒    Human Epidermal Melanocytes-fetal    5 x 10^5 cells/vial
HDF-f    人真皮成纖維細胞--胎兒    Human Dermal Fibroblasts-fetal    5 x 10^5 cells/vial
HDF-n    人真皮成纖維細胞--新生    Human Dermal Fibroblasts-neonate    5 x 10^5 cells/vial
HDF-a    人真皮成纖維細胞--成人    Human Dermal Fibroblasts-adult    5 x 10^5 cells/vial 毛發(fā)細胞系統(tǒng)        
HHDPC    人毛乳頭細胞    Human Hair Dermal Papilla Cells    5 x 10^5 cells/vial
HHGMC    人生發(fā)基質細胞    Human Hair Germinal Matrix Cells    5 x 10^5 cells/vial
HHORSC    人毛囊外根鞘細胞    Human Hair Follicular Outer Root Sheath Cells    5 x 10^5 cells/vial
HHIRSC    人毛囊內根鞘細胞    Human Hair Follicular Inner Root Sheath Cells    5 x 10^5 cells/vial
HHFK    人毛囊角質細胞    Human Hair Folliclar Keratinocytes    5 x 10^5 cells/vial
            
    淋巴細胞系統(tǒng)        
HLEC    人淋巴內皮細胞    Human Lymphatic Endothelial Cells    5 x 10^5 cells/vial
HLF    人淋巴成纖維細胞    Human Lymphatic Fibroblasts    5 x 10^5 cells/vial
HTEpiC    人扁桃體上皮細胞    Human Tonsil Epithelial Cells    5 x 10^5 cells/vial
HTF    人扁桃體成纖維細胞    "Human Tonsil Fibroblasts
"    5 x 10^5 cells/vial 
HTyF    人胸腺成纖維細胞    Human Thymus Fibroblasts    5 x 10^5 cells/vial