人熱休克蛋白72(HSP-72)ELISA 試劑盒

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人熱休克蛋白72(HSP-72)ELISA 試劑盒

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如有什么問(wèn)題請(qǐng)給我們或者留言，告訴我您的需要，并留下您寶貴的意見和建議。

人熱休克蛋白72(HSP-72)ELISA 試劑盒  

本試劑盒僅供研究使用
檢測(cè)范圍：歡迎或或索取原版說(shuō)明書
zui低檢測(cè)限：歡迎或或索取原版說(shuō)明書

有效期：6個(gè)月
預(yù)期應(yīng)用：ELISA法定量測(cè)定血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清或其它相關(guān)生物液體中的含量。
說(shuō)明
1．試劑盒保存：-20℃（較長(zhǎng)時(shí)間不用時(shí)）；2-8℃（頻繁使用時(shí)）。
2．濃洗滌液低溫保存會(huì)有鹽析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶。
3．中、英文說(shuō)明書可能會(huì)有不*之處，請(qǐng)以英文說(shuō)明書為準(zhǔn)。
4．剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會(huì)含有少許水樣物質(zhì)，此為正?，F(xiàn)象，不會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成任何影響。
實(shí)驗(yàn)原理
用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗該指標(biāo)抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、化的抗該指標(biāo)抗體、HRP標(biāo)記的親和素，經(jīng)過(guò)*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的該指標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），計(jì)算樣品濃度。
試劑盒組成及試劑配制
1.         酶聯(lián)板（Assay plate ）：一塊（96孔）。
2.         標(biāo)準(zhǔn)品（Standard）：2瓶（凍干品）。
3.         樣品稀釋液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。
4.         標(biāo)記抗體稀釋液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5.         辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6.         標(biāo)記抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7.         辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）
8.         底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
9.         濃洗滌液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10.     終止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。

 人熱休克蛋白72(HSP-72)ELISA 試劑盒  
10、標(biāo)本的采集及保存
1.         血清：全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)了夜后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2.         血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3.         細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
注：標(biāo)本溶血會(huì)影響zui后檢測(cè)結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。
標(biāo)本的稀釋原則：
首先通過(guò)文獻(xiàn)檢索的方式了解待測(cè)樣本的大致含量，確定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)。只有稀釋至標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍內(nèi)，檢測(cè)的結(jié)果才是準(zhǔn)確的。稀釋的過(guò)程中，應(yīng)做好詳細(xì)的記錄。zui后計(jì)算濃度時(shí)，稀釋了“N”倍，標(biāo)本的濃度應(yīng)再乘以“N”。
標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋原則：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10分鐘以上，然后反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為300 pg/ml，做系列倍比稀釋后，分別稀釋300 pg/ml，150 pg/ml，75 pg/ml，37.5 pg/ml，18.5 pg/ml，9 pg/ml，4.5 pg/ml，樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度0 pg/ml，臨用前15分鐘內(nèi)配制。
如配制150 pg/ml標(biāo)準(zhǔn)品：取0.5ml（不要少于0.5ml）300 pg/ml的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
標(biāo)記抗體的稀釋原則：
臨用前以標(biāo)記抗體稀釋液稀釋，稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制（每孔100μl），實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl標(biāo)記抗體加990μl標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時(shí)內(nèi)配制。
辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素的稀釋原則：
臨用前以辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液稀釋，稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制（每孔100μl），實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素加990μl辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時(shí)內(nèi)配制。
操作步驟
實(shí)驗(yàn)開始前，請(qǐng)?zhí)崆芭渲煤盟性噭?，試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。每次檢測(cè)都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如樣品濃度過(guò)高時(shí)，用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍。
1.         加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。
為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2.         棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加標(biāo)記抗體工作液 100μl（取1μl標(biāo)記抗體加99μl標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），37℃,60分鐘。
3.         溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。
4.         每孔加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素工作液（同標(biāo)記抗體工作液） 100μl，37℃，60分鐘。
5.         溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。
6.         依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。
7.         依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8.         用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。
注：
1. 用戶在初次使用試劑盒時(shí)，應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘，以便試劑集中到管底。
2. 每次實(shí)驗(yàn)留一孔作為空白調(diào)零孔，該孔不加任何試劑，只是zui后加底物溶液及2N H2SO4。測(cè)量時(shí)先用此孔調(diào)OD值至零。
3. 為防止樣品蒸發(fā)，試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜。
4. 未使用完的酶標(biāo)板或者試劑，請(qǐng)于2-8℃保存。標(biāo)準(zhǔn)品、標(biāo)記抗體工作液、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配置使用。請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過(guò)的標(biāo)準(zhǔn)品、標(biāo)記抗體工作液或、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素工作液。
5. 建議檢測(cè)樣品時(shí)均設(shè)雙孔測(cè)定，以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過(guò)程數(shù)次。
自動(dòng)洗板：如果有自動(dòng)洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過(guò)程中。

計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)（對(duì)數(shù)坐標(biāo)），OD值為縱坐標(biāo)（普通坐標(biāo)），在半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。

注意事項(xiàng)
1. 當(dāng)混合蛋白溶液時(shí)應(yīng)盡量輕緩，避免起泡。
2. 洗滌過(guò)程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽(yáng)性。
3. 一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，使用排槍加樣。
4. 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。
5. 如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高，請(qǐng)先稀釋后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以稀釋倍數(shù)。
6. 在配制標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液工作液時(shí)，請(qǐng)以相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。
7. 底物請(qǐng)避光保存。
8. 不要用其它生產(chǎn)廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。  

 人熱休克蛋白72(HSP-72)ELISA 試劑盒  

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人類白細(xì)胞抗原G(HLA-G)ELISA試劑盒    Human leukocyte antigen G,HLA-G ELISA試劑盒 
人補(bǔ)體片斷3b(C3b)ELISA試劑盒    Human Complement fragment 3b,C3b ELISA試劑盒
人補(bǔ)體片斷4b(C4b)ELISA試劑盒    Human Complement fragment 4b,C4b ELISA試劑盒
人補(bǔ)體片斷5b(C5b)ELISA試劑盒    Human Complement fragment 5b,C5b ELISA試劑盒
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人血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)ELISA試劑盒    Human thrombomodulin,TM ELISA試劑盒 
人纖溶抑制因子/激活的纖溶抑制物(TAFI)ELISA試劑盒    Human Thrombin activatable fibrinolysis inhibitor,TAFI ELISA試劑盒
人血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)ELISA試劑盒    Human plaet membrane glycoprotein ⅡbⅢa,GP-ⅡbⅢa ELISA試劑盒
人血小板反應(yīng)蛋白/敏感蛋白1(TSP-1)ELISA試劑盒     Human thrombospondin 1,TSP-1 ELISA試劑盒
人血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)ELISA試劑盒    Human alpha-granular membrane protein,GMP-140 ELISA試劑盒
人末端補(bǔ)體復(fù)合物C5b-9(TCC C5b-9)ELISA試劑盒     Human terminal complement complex C5b-9,TCC C5b-9 ELISA試劑盒
人補(bǔ)體蛋白4(C4)ELISA試劑盒    Human Complement 4,C4 ELISA試劑盒 
人補(bǔ)體蛋白3(C3)ELISA試劑盒     Human Complement 3,C3 ELISA試劑盒
人Ⅱ(FⅡ)ELISA試劑盒    Human coagulation factor Ⅱ,FⅡ ELISA試劑盒
人類白細(xì)胞抗原B27(HLA-B27)ELISA試劑盒    Human leucocyte antigen B27,HLA-B27 ELISA試劑盒
人結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)ELISA試劑盒    Human Haptoglobin,Hpt/HP ELISA試劑盒
人血清總補(bǔ)體(CH50)ELISA試劑盒    Human 50% complement hemolysis,CH50 ELISA試劑盒
人過(guò)敏毒素/補(bǔ)體片斷4(C4a)ELISA試劑盒    Human Complement fragment 4a,C4a ELISA試劑盒
人補(bǔ)體片斷5a(C5a)ELISA試劑盒    Human Complement fragment 5a,C5a ELISA試劑盒
人補(bǔ)體片斷3a(C3a)ELISA試劑盒    Human Complement fragment 3a,C3a ELISA試劑盒
人Ⅷ相關(guān)抗原(Ⅷ-Ag)ELISA試劑盒    Human coagulation factor Ⅷ related antigen,FⅧ-Ag ELISA試劑盒
人Ⅸ(FⅨ)ELISA試劑盒    Human coagulation factor Ⅸ,FⅨ ELISA試劑盒
人Ⅹ(FⅩ)ELISA試劑盒    Human coagulation factor Ⅹ,FⅩ ELISA試劑盒
人血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子(VWF)ELISA試劑盒    Human von Willebrand Factor,vWF ELISA試劑盒
人纖溶酶抗纖溶酶復(fù)合物(PAP)ELISA試劑盒    Human plasmin-antiplasmin complex,PAP ELISA試劑盒
人抗復(fù)合物(TAT)ELISA試劑盒    Human thrombin-antithrombin complex,TAT ELISA試劑盒
人抗受體(ATR)ELISA試劑盒    Human anti-thrombin receptor,ATR ELISA試劑盒
人受體(TR)ELISA試劑盒    Human thrombin receptor,TR ELISA試劑盒
人第八因子相關(guān)抗原(FⅧAg)ELISA試劑盒    Human Factor Ⅷ-related Antigen,FⅧAg ELISA試劑盒
人血纖蛋白原(Fbg)ELISA試劑盒    Human Fibrinogen,Fbg ELISA試劑盒
人主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類(MHCⅠ/HLAⅠ)ELISA試劑盒    Human major histocompatibility complex Ⅰ,MHCⅠ/HLAⅠ ELISA試劑盒
人抗Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)ELISA試劑盒    Human Anti-Thrombin Ⅲ,AT-Ⅲ ELISA試劑盒
人血栓前體蛋白(TpP)ELISA試劑盒    Human thrombus precursor protein,TpP ELISA試劑盒
人淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原3(LFA-3/CD58)ELISA試劑盒     Human lymphocyte function associated antigen 3,LFA-3 ELISA試劑盒 
人主要組織相容性復(fù)合體Ⅲ類(MHCⅢ/HLA-Ⅲ)ELISA試劑盒    Human major histocompatibility complex Ⅲ,MHCⅢ/HLA-Ⅲ ELISA試劑盒

 人熱休克蛋白72(HSP-72)ELISA 試劑盒