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人脂蛋白脂酶(LPL)ELISA試劑盒

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更新時(shí)間:2014-12-29 15:07:52瀏覽次數(shù):235次

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人脂蛋白脂酶(LPL)ELISA試劑盒
英文名稱: Human lipoprotein lipase,LPL ELISA KIT
規(guī)格:48T/96T 檢測(cè)方法:固相夾心法 存儲(chǔ):2-8°C 保質(zhì)期:半年

人脂蛋白脂酶(LPL)ELISA試劑盒

英文名稱: Human lipoprotein lipase,LPL ELISA KIT

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ELISA實(shí)驗(yàn)操作步驟的一般常見方法
方法一)用于檢測(cè)未知抗原的雙抗體夾心法:
1)包被:用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃過夜。
次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡(jiǎn)稱洗滌,下同)。
2)加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí)。然后洗滌。(同時(shí)做空白孔,陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔)。
3)加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小時(shí),洗滌。
4)加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘。
5)終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽(yáng)性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,
以“+"、“-"號(hào)表示。也可測(cè)O·D值:在ELISA檢測(cè)儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔O·D值,
若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽(yáng)性。
方法二)用于檢測(cè)未知抗體的間接法:
用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過夜。次日洗滌3次。加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,
置37℃孵育1小時(shí),洗滌。(同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照)于反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml,37℃孵育30-60分鐘,洗滌,
zui后一遍用DDW洗滌。其余步驟同“雙抗體夾心法"的4、5、6。 

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