好看日韩在线视频免费,日本不卡一区二区三区,三级a全过程在线观看,亚洲精品国产9999久久久久

上海雅吉生物科技有限公司

當(dāng)前位置:首頁   >>   資料下載   >>   大腸桿菌轉(zhuǎn)化實驗(二)一步法

大腸桿菌轉(zhuǎn)化實驗(二)一步法

時間:2015/1/21閱讀:391
分享:
  • 提供商

    上海雅吉生物科技有限公司
  • 資料大小

    13.8KB
  • 資料圖片

    查看
  • 下載次數(shù)

    258次
  • 資料類型

    JPG 圖片
  • 瀏覽次數(shù)

    391次
點擊免費下載該資料

大腸桿菌轉(zhuǎn)化可以:(1)將重組DNA分子導(dǎo)入大腸桿菌受體細胞進行復(fù)制,增殖和表達,以獲得目的基因;(2)驗證大腸桿菌感受態(tài)細胞效果;(3)用于分子生物學(xué)其他研究。
實驗材料    大腸桿菌
試劑、試劑盒    TSS葡萄糖LB
儀器、耗材    離心機分光光度計搖床
實驗步驟    
1.  按1:100的比例將培養(yǎng)的菌液如人到新鮮的LB培養(yǎng)液中,于37℃培養(yǎng)至為OD600為0.3~0.4。
 
2.  加入等體積的2×TSS于菌液中,在冰上溫和地混勻。
 
3.  將100 μl 感受恣細菌和1~5 μl DNA加入到一個冰冷的聚丙烯管或玻璃管中,4℃放置5~60 min。

4.  加入0.9 ml 含20 mmol/l 萄糖的LB培養(yǎng)液,37℃溫和振蕩培養(yǎng)30~60 min 在合適的平扳上挑選轉(zhuǎn)化體。

率電轉(zhuǎn)化法

實驗材料    大腸桿菌
試劑、試劑盒    LBSOC
儀器、耗材    電轉(zhuǎn)化儀離心機分光光度計
實驗步驟    
1.  接種一個單菌落于5 ml LB培養(yǎng)液,37℃溫和振搖培養(yǎng)5 h 或。

2.   將2.5 ml 培養(yǎng)物加人到盛有500 ml LB培養(yǎng)液的2 L 燒瓶中,37℃搖勻振蕩培養(yǎng)至OD600為0.5~0.6。
 
3.  細菌在冰水浴冷卻10~15 min,然后轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的1升離心瓶中。于2℃,5 000 g 離心20 min 沉淀用5 ml 預(yù)冷的水溶解6。

4.  加入500 ml 冰冷的水,混勻,按步驟3重復(fù)離心1次,立即將上清倒掉,用殘余的液體重懸細胞。
 
5.  新鮮制得的細菌

(1)將懸浮液加入到預(yù)冷的50 ml 聚丙烯管中,2℃,5 000 g 離心10 min。

(2)估計細胞沉淀的體積,沉淀用等體積的冰冷水重懸。

(3)按50~300 μl 分裝于預(yù)冷的微量離心管中。

6.  凍存細菌

(1)加入40 ml 冰冷的10%甘油,混合,然后按照步驟5離心。

(2)估計沉淀的體積,然后加入等體積的冰冷的10%甘油,重懸菌體。

(3)按50~300 μl 分裝于預(yù)冷的微量離心管中。

(4)于干冰上冷凍并貯存于-80℃。

7.  將電轉(zhuǎn)化儀調(diào)到2.5 kV、 25 μF ,脈沖控制器調(diào)到200~400Ω。

8.  將1 μl 質(zhì)粒DNA加入到盛有新鮮制備的細菌或融化的凍存細菌的小管中,混勻。
 
9.  將轉(zhuǎn)化混合物轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的電轉(zhuǎn)化池中,吸干池的外表面,然后放入樣品槽中。
 
10.  進行脈沖電轉(zhuǎn)化,然后取出電轉(zhuǎn)化池,馬上加入1 ml SOC培養(yǎng)液,并且用巴斯德吸管轉(zhuǎn)移到無菌的培養(yǎng)管中。

11.  于37℃,中速振蕩培養(yǎng)30~60 min。

12.  分小份涂布于含有抗生素的LB平板上。

會員登錄

×

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標(biāo)簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復(fù)您~

以上信息由企業(yè)自行提供,信息內(nèi)容的真實性、準(zhǔn)確性和合法性由相關(guān)企業(yè)負責(zé),環(huán)保在線對此不承擔(dān)任何保證責(zé)任。

溫馨提示:為規(guī)避購買風(fēng)險,建議您在購買產(chǎn)品前務(wù)必確認供應(yīng)商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量。

在線留言
国产一级第一级毛片| 亚洲福利左线观看| 老色鬼精品视频二区三区| 色狠狠久久av北条麻妃| 亚洲女同一区二区三久久精品| 亚洲福利左线观看| 大肌巴日小个子女人视频| 夜色成人免费观看| 欧美真人性爱视频| 鸡巴操骚逼视频播放| 一色道久久88加勒比一| 蜜桃av噜噜一区二区三区免费| 男人操女人黄片黄色| 操女人真人大骚逼| 男人草女人的视频免费看| 91kaobi视频在线| 亚洲国产成人手机版| 中文字幕在线视频一区二区| 欧美老熟妇又粗又大| 免费观看的黄视频一级国产| 日韩伦理视频一区二区三区| 欧美人与性动交b欧美精品| 黄网官方在线观看| 国产日本欧美激情| 娇嫩的被两根粗大的np| 久久久久久久久中文字幕| 亚洲一区二区三区大胆视频| 欧美激情在线播放第一页| 欧美亚洲干妞内射| 欧美精品第15页| 天堂久久久久久久久久久| 国产午夜福利片无码视频| 小穴抽插流水视频| 最新日本一区二区三区免费看| 差鸡巴没码在线观看| 久久久久精品无码专区喝奶| 国产品无码一区二区三区在线| 大鸡巴操逼视频免费| 亚欧日韩国产在线| 日韩精品欧美喷水| 天天日天天干天天天天操|