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江蘇綠葉生物科技有限公司

抗血清的制備方法

時間:2015-9-10閱讀:703
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    昨日,來自南京農(nóng)業(yè)大學王老師抗血清的制備方法和過程,我司趙熱情地一一解答。

抗血清指含有抗體的血清。傳統(tǒng)的抗血清制備方法是將某種抗原通過多次注入動物,數(shù)十天后或數(shù)月后,采集動物血,立即分離出血清。此抗血清在保存或應用前必須作效價和特異性鑒定及純化。

(一)免疫動物的選擇  免疫動物的選擇基本要求:  1.抗原與免疫動物的種屬差異越遠越好。  2.動物必須適齡、健壯、無感染、體重合乎要求。  3.不同動物對同一免疫原有不同的免疫應答表現(xiàn)。因此針對不同性質(zhì)的免疫原,選用相應的動物。蛋白質(zhì)抗原大部分動物皆適合;甾類激素多用家免;酶類多用豚鼠。  4.抗血清要求:為Rrabbit)型或Hhorse)型血清。R型抗血清是以家兔為代表的小型動物產(chǎn)生的抗血清,能和很小量抗原結合形成沉淀線,而H型抗血清則以馬為代表的大型動物產(chǎn)生的抗血清,較少用于沉淀反應。  此外需要制備大量免疫血清時,應選用馬、綿羊等大動物;若需要量不多,則選用家兔、豚鼠和雞等小動物。

(二)免疫方法及途徑  1.免疫原的注射劑量:應考慮抗原性強弱、分子量大小、動物的個體狀態(tài)和免疫時間??贵w需要量多,時間間隔長,劑量可適當加大。  2.免疫途徑:通常有靜脈、腹腔、肌肉、皮內(nèi)、皮下、淋巴結及足掌等。若抗原寶貴可采用淋巴結內(nèi)微量注射法;半抗原宜皮內(nèi)多點注射。  3.免疫方案:根據(jù)設計的目的要求、抗原性質(zhì)、佐劑的種類來制定免疫方案。可采用全量免疫法、微量免疫法或混合免疫法。  4.抗體產(chǎn)生階段:可分靜止期(約2天,血中尚無抗體);指數(shù)期(約4天左右,抗體迅速上升);穩(wěn)定期(約24周,抗體保持一個穩(wěn)定水平);下降期(約幾個月后,此時抗體緩慢下降)四個階段。 

(三)動物采血法  動物采血法有頸動脈放血法、心臟采血法、靜脈多次采血法等。

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