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當(dāng)前位置:江蘇綠葉生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>如何判定ELISA試劑盒試劑是否符合要求
一:檢驗(yàn)技師應(yīng)具備從事實(shí)驗(yàn)室操作的基本素質(zhì)和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。能熟練操作實(shí)驗(yàn)儀器、器械,具有一定總結(jié)和分析問題的能力,對ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的意外情況能及時(shí)妥善解決。
二:使用校對過的微量移液器,排除自然誤差。移液器準(zhǔn)確與否對定量檢測尤為重要。
三:仔細(xì)閱讀說明書嚴(yán)格按照說明書要求進(jìn)行規(guī)范化操作。不同批號的試劑不可混用。值得改進(jìn)的地方,反復(fù)試驗(yàn)確定成立后才能改進(jìn)。
四:洗滌*:洗板不*,酶結(jié)合物本底顯色會呈現(xiàn)假陽性。洗滌液要新鮮,現(xiàn)用現(xiàn)配,陳舊的洗滌液會出現(xiàn)本底增高現(xiàn)象,也可能出現(xiàn)假陽性。
五:嚴(yán)控反應(yīng)時(shí)間:反應(yīng)時(shí)間過長,酶失活;反應(yīng)時(shí)間過短,酶結(jié)合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結(jié)合,生成物結(jié)構(gòu)松散不牢固,容易洗掉,都可能造成假陰性。
六:注意ELISA試劑盒保存期,過保存期的試劑不能使用。
七:評估試劑的實(shí)用性:試劑的穩(wěn)定與否,對準(zhǔn)確率的高低到頭重要。在試劑啟用前,應(yīng)進(jìn)行陰、陽對照及樣品反復(fù)比照試驗(yàn)。顯色時(shí)間過短,加入終止液反應(yīng)終止后,底物結(jié)合物的量過少,易ELISA試劑盒出現(xiàn)假陰性。超過顯色要求時(shí)間后顯色,應(yīng)判為假陽性,這可能與試劑本身有關(guān)。加顯色劑后立即顯色,不可報(bào)陽性,這可能是本底顯色的結(jié)果。
八:加樣要準(zhǔn)確、快速
如果加樣不準(zhǔn)確,酶生成物的量不能確定,直接影響顯色結(jié)果。顯色的深淺及A值的測定與加入顯色劑和終止液的量有關(guān),所以加樣應(yīng)慎重。要求在一定時(shí)間內(nèi)加樣完畢的實(shí)驗(yàn),如果加樣遲緩,便出現(xiàn)誤差,而且ELISA試劑盒試劑長時(shí)間暴露在外,尤其室溫過高時(shí),保存期會縮短甚至失效。
一:檢驗(yàn)技師應(yīng)具備從事實(shí)驗(yàn)室操作的基本素質(zhì)和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。能熟練操作實(shí)驗(yàn)儀器、器械,具有一定總結(jié)和分析問題的能力,對ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的意外情況能及時(shí)妥善解決。
二:使用校對過的微量移液器,排除自然誤差。移液器準(zhǔn)確與否對定量檢測尤為重要。
三:仔細(xì)閱讀說明書嚴(yán)格按照說明書要求進(jìn)行規(guī)范化操作。不同批號的試劑不可混用。值得改進(jìn)的地方,反復(fù)試驗(yàn)確定成立后才能改進(jìn)。
四:洗滌*:洗板不*,酶結(jié)合物本底顯色會呈現(xiàn)假陽性。洗滌液要新鮮,現(xiàn)用現(xiàn)配,陳舊的洗滌液會出現(xiàn)本底增高現(xiàn)象,也可能出現(xiàn)假陽性。
五:嚴(yán)控反應(yīng)時(shí)間:反應(yīng)時(shí)間過長,酶失活;反應(yīng)時(shí)間過短,酶結(jié)合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結(jié)合,生成物結(jié)構(gòu)松散不牢固,容易洗掉,都可能造成假陰性。
六:注意ELISA試劑盒保存期,過保存期的試劑不能使用。
七:評估試劑的實(shí)用性:試劑的穩(wěn)定與否,對準(zhǔn)確率的高低到頭重要。在試劑啟用前,應(yīng)進(jìn)行陰、陽對照及樣品反復(fù)比照試驗(yàn)。顯色時(shí)間過短,加入終止液反應(yīng)終止后,底物結(jié)合物的量過少,易ELISA試劑盒出現(xiàn)假陰性。超過顯色要求時(shí)間后顯色,應(yīng)判為假陽性,這可能與試劑本身有關(guān)。加顯色劑后立即顯色,不可報(bào)陽性,這可能是本底顯色的結(jié)果。
八:加樣要準(zhǔn)確、快速
如果加樣不準(zhǔn)確,酶生成物的量不能確定,直接影響顯色結(jié)果。顯色的深淺及A值的測定與加入顯色劑和終止液的量有關(guān),所以加樣應(yīng)慎重。要求在一定時(shí)間內(nèi)加樣完畢的實(shí)驗(yàn),如果加樣遲緩,便出現(xiàn)誤差,而且ELISA試劑盒試劑長時(shí)間暴露在外,尤其室溫過高時(shí),保存期會縮短甚至失效。
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