光穩(wěn)定性（photostability）是熒光蛋白的一個(gè)重要特征。不過(guò)，它并不是一成不變的。研究人員發(fā)現(xiàn)，活細(xì)胞中綠色熒光蛋白（GFP）的光穩(wěn)定性受到培養(yǎng)基組分以及細(xì)胞生長(zhǎng)條件的影響。

由于熒光蛋白具有自發(fā)發(fā)出熒光的*能力，它們被廣泛應(yīng)用于追蹤基因表達(dá)、標(biāo)記感興趣的蛋白質(zhì)，和實(shí)時(shí)監(jiān)控細(xì)胞的生理狀況。野生型的GFP來(lái)自水母，盡管它發(fā)出絢麗的熒光，但在高等動(dòng)物的細(xì)胞中，它的光譜并非*，且在37oC不能正確折疊。不過(guò)，這些問(wèn)題在不久之后就通過(guò)突變解決了。增強(qiáng)型GFP（EGFP）可能就是人們zui熟知的突變體。

當(dāng)然，除了熒光亮度，光穩(wěn)定性也是熒光蛋白的一個(gè)重要特征。延時(shí)顯微鏡、3D圖像重建和單分子檢測(cè)等應(yīng)用會(huì)受到光穩(wěn)定性的影響。為了提高熒光蛋白的光穩(wěn)定性，人們廣泛采用了定點(diǎn)突變和隨機(jī)誘變。zui近，研究人員也建議對(duì)成像培養(yǎng)基的組分進(jìn)行優(yōu)化。這是因?yàn)椋?/span>GFP參與了光驅(qū)動(dòng)的氧化還原反應(yīng)，導(dǎo)致綠色到紅色的光轉(zhuǎn)換。因此，培養(yǎng)基組分對(duì)這些反應(yīng)的抑制可增強(qiáng)綠色通道的光穩(wěn)定性。

于是，研究人員測(cè)定細(xì)胞生長(zhǎng)條件和培養(yǎng)基組分對(duì)EGFP光穩(wěn)定性的影響，以便找出EGFP成像的*條件。他們利用EGFP-C1載體轉(zhuǎn)染了HEK293T細(xì)胞，并在轉(zhuǎn)染48小時(shí)后用Leica的AF6000 LX熒光顯微鏡成像。在成像之前，細(xì)胞培養(yǎng)基被更換成新鮮的DMEM或其他待研究的培養(yǎng)基（Ham's F12和RPMI 1640）。

他們發(fā)現(xiàn)，所有培養(yǎng)基都不影響EGFP在細(xì)胞中的初始亮度。在DMEM和RPMI 1640中表達(dá)的EGFP光穩(wěn)定性幾乎相同，不過(guò)蕓香葉苷的添加使光穩(wěn)定性增加了數(shù)倍。相比之下，Ham's F12培養(yǎng)基則帶來(lái)了非常高的EGFP光穩(wěn)定性（DMEM的6-7倍），且?guī)缀醪皇苁|香葉苷的影響。

與DMEM相比，F12培養(yǎng)基的核黃素和吡哆醇的濃度降低，而這些維生素會(huì)明顯降低EGFP的光穩(wěn)定性。同時(shí)，氧化還原活性化合物，如氰鈷胺（微生物B12）、*、次黃嘌呤和胸苷的濃度增高。研究人員進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，這些化合物單獨(dú)添加到DMEM培養(yǎng)基中，對(duì)EGFP的光漂白沒(méi)有任何影響，不過(guò)它們的組合能使光穩(wěn)定性提高2倍。

此外，他們還發(fā)現(xiàn)，EGFP的光漂白速率在很大程度上取決于細(xì)胞的生長(zhǎng)條件，如細(xì)胞密度和血清的濃度。在2% FBS下檢測(cè)到zui低的光穩(wěn)定性，而20% FBS下zui高。對(duì)于DMEM培養(yǎng)基，這兩者的差異在2.5-3倍。

基于這些研究，作者認(rèn)為，熒光蛋白光穩(wěn)定性的比較應(yīng)盡可能在相同的條件下平行開(kāi)展，而將不同論文中的數(shù)值拿來(lái)比較是非常不準(zhǔn)確的。