牛腎上腺素(EPI)ELISA試劑盒
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
牛腎上腺素(EPI)ELISA試劑盒
儀器質(zhì)控
為使儀器保持*工作狀態(tài)應(yīng)建立維護(hù)和校正儀器的標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP),所要控制的儀器包括移液器(加樣槍),水浴箱(溫箱),洗板機(jī)和酶標(biāo)儀。
◎移液器:ELISA加樣量?。?-100ul),其準(zhǔn)確性直接影響實驗結(jié)果,利用稱重法檢查:吸取刻度指示量的水,萬分之一天平稱重后計算吸量是否準(zhǔn)確,一般應(yīng)在±10%以內(nèi);
◎水浴箱 經(jīng)常檢查水浴箱溫度計所示的溫度和水中(或溫箱內(nèi))實測溫度是否*,允許有±1℃的誤差;
◎洗板機(jī) 每個廠家設(shè)置洗板后的殘留液有各自的規(guī)定一般不超過2ul ,人工扣板時,墊紙不濕,定期檢查管孔是否堵塞;
◎酶標(biāo)儀 經(jīng)常維護(hù)其光學(xué)部分,防止濾光片霉變,定期檢測校正,使其保持良好的工作性能。
牛腎上腺素(EPI)ELISA試劑盒
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