1、預(yù)先配制凍存液：

凍存液比例多種，根據(jù)細(xì)胞的特性進(jìn)行調(diào)整凍存液的比例：

5%—10%DMSO + 20%—90%血清 + 0%—70%基礎(chǔ)培養(yǎng)液；

2、取對數(shù)生長期的細(xì)胞，去除舊培養(yǎng)液，用PBS清洗1-2次；去掉培養(yǎng)瓶里的殘余血清；

3、細(xì)胞消化0.5-2min（具體時間根據(jù)鏡下形態(tài)判斷），顯微鏡下觀察細(xì)胞，細(xì)胞胞質(zhì)回縮，細(xì)胞間不再連接成片，此時加入*培養(yǎng)基終止消化；

4、用巴氏吸管輕輕吹打細(xì)胞，形成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液1000r/min左右條件下離心3-5min；

5、棄上清，加入適量預(yù)先配制好的凍存液，巴氏吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻，計(jì)數(shù)，調(diào)節(jié)凍存液中的細(xì)胞密度為5×106/ml～1×107/ml；

6、將細(xì)胞分裝入凍存管中，每管1-1.5ml；

7、凍存管標(biāo)記細(xì)胞名稱，凍存時間，操作者及細(xì)胞代數(shù)信息。對于懸浮細(xì)胞凍存，則直接收集離心細(xì)胞，其他步驟相同。

注意事項(xiàng):

1、需凍存保種的細(xì)胞應(yīng)在生長良好且存活率高，其密度約為80-90％的狀態(tài)。細(xì)胞凍存前應(yīng)保證細(xì)胞的活力好，無污染。

2、在細(xì)胞凍存過程中，所結(jié)的冰晶對細(xì)胞傷害較大，所以過程一定要慢。凍存或者復(fù)蘇用新配制的

上海紀(jì)寧實(shí)業(yè)有限公司位于中國*大城市——中華人民共和國直轄市之一的上海，已發(fā)展成集科研、生產(chǎn)、銷售為一體的創(chuàng)新性企業(yè)。公司專注于生物、生化領(lǐng)域產(chǎn)品銷售，主要經(jīng)營的有ELISA試劑盒、生化試劑、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品、對照品、細(xì)胞、血清、培養(yǎng)基等生化產(chǎn)品。