1. 加樣一般運用加液器，在ELISA試劑盒中一般有4次加樣：加標本、加酶結合物、加底物和加中止液。加標本時有必要每份標本運用一支移液器吸嘴，以免穿插污染。加酶結合物、底物和中止液時則不需更換吸嘴。

2. 在成批手工檢測中，還應留心操作時差的影響。加樣及混勻時間的差異，使抗原抗體反應和酶促反應時間不一致，對競爭法及定量檢測影響很大，不留心可能會導致錯誤成果或定量禁絕。

3. 跟著病情的進展或由其他因素影響，某些抗體在機體內的含量發(fā)生大幅動搖，因此有必要對標本進行預處理。直接法測定中，標本恰當稀釋還可下降非特異性反應。

4. 判定成果須運用ELISA試劑盒測讀儀，比色法判讀可選擇單波長或雙波長，依據反應液色彩的不同選用不同波長的濾光片，以空白孔校零測定反應孔的吸光度值。酶標儀具有杰出的重復性。  

5. 洗刷是ELISA試劑盒操作過程中決定試驗勝敗的一個關鍵步驟。目的是除掉未結合的免疫反應物，中止抗原抗體反應，除掉標本中與反應無關的成分、游離的酶標物以及反應過程中吸附于固相載體上的非特異性物質?？捎孟窗鍣C洗板或手工洗板，前者洗刷質量較好，各反應孔洗刷效果均一，批內、批間差異小，手工洗板應留心控制各孔洗刷效果，差異不宜太大。