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ELISA試劑盒的免疫學(xué)活性

時(shí)間:2016-3-2閱讀:1363
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 在ELISA試劑盒中,用作固相載體的小珠一般為直徑0.6cm的圓珠,表面經(jīng)磨砂處理后吸附面積大大增加。ELISA板孔的吸附面積約為200mm2,小珠均為1000mm2,將近ELISA板孔的5倍。吸附面積的增大即意味著固相抗原或抗體量的增加。再者,球型小珠的表面弧度更有利于吸附的抗原決定簇或抗體結(jié)合位點(diǎn)的暴露面處于反應(yīng)狀態(tài),因此珠式ELISA的反應(yīng)往往更為靈敏。小珠的另一特點(diǎn)是更易于使洗滌*,使用特殊的洗滌器,使小珠在洗滌過程中滾動(dòng)淋洗,其洗滌效果遠(yuǎn)較板孔的浸泡式為好。但由于磨砂工藝的難度較大,小珠的均一性較差。
    固相載體在ELISA試劑盒測(cè)定過程中作為吸附劑和容器,不參與化學(xué)反應(yīng)??勺鱁LISA中載體的材料很多,zui常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的性能,抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后仍保留原來,加之它的價(jià)格低廉,所以被普遍采用。聚苯乙烯為塑料,可制成各種形式。
    ELISA載體的形狀主要有三種:微量滴定板、小珠和小試管。以微量滴定板zui為常用,于EILSA的產(chǎn)品稱為ELISA板,上標(biāo)準(zhǔn)的微量滴定板為8×12的96孔式。為便于作少量標(biāo)本的檢測(cè),有制成8聯(lián)孔條或12聯(lián)孔條的,放入座架后,大小與標(biāo)準(zhǔn)ELISA試劑盒板相同。ELISA板的特點(diǎn)是可以同時(shí)進(jìn)行大量標(biāo)本的檢測(cè),并可在特制的比色計(jì)上迅速讀出結(jié)果?,F(xiàn)在已有多種自動(dòng)化儀器用于微量滴定板型的ELISA檢測(cè),包括加樣、洗滌、保溫、比色等步驟,對(duì)操作的標(biāo)準(zhǔn)化極為有利。聚苯乙烯經(jīng)射線照射后,其吸附性能特別是對(duì)免疫球蛋白的吸附性能增加,應(yīng)用于雙抗體夾心法可使固相上抗體量增多,但用于間接法測(cè)抗體時(shí)空白值較大。
    良好的ELISA板應(yīng)該是吸附性能好,空白值低,孔底透明度高,各板之間、同一板各孔之間、同一板各孔之間性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于原料的不同和制作工藝的差別,各種產(chǎn)品的質(zhì)量差異很大,因此,每一批號(hào)的ELISA板在使用前須事先檢查其性能。常用的檢查方法為:ELISA試劑盒以一定濃度的人IgG(一般為10ng/ml)包被ELISA板各孔,洗滌后每孔內(nèi)加入適當(dāng)稀釋度的酶標(biāo)抗人IgG抗體,保溫后洗滌,加底物顯色,終止酶反應(yīng)后,分別測(cè)每孔溶液的吸光度??刂品磻?yīng)條件,使各孔讀數(shù)在吸光度0.8左右。計(jì)算全部讀數(shù)的平均值。所有單個(gè)讀數(shù)與全部讀數(shù)的均數(shù)之差,應(yīng)小于10%。

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