1、ELISA試劑盒的原理和類型
ELISA的根底是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶符號。在固相載體表面的抗原或抗體仍堅持其免疫學活性，酶符號的抗原或抗體既保存其免疫學活性，又保存酶的活性。在測守時，受檢標本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反響。用洗刷的辦法使固相載體上構成的抗原抗體復合物與液體中的別的物質分隔。再參加酶符號的抗原或抗體，也經(jīng)過反響而在固相載體上。此刻固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈必定的比例。參加酶反響的底物后，底物被酶催化變成有色產品，產品的量與標本中受檢物質的量直接有關，故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。因為酶的催化功率很高，間接地擴大了免疫反響的成果，使測定辦法抵達很高的敏感度。
2、ELISA試劑盒的類型
ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。在這種測定辦法中有三個必要的試劑：（1）固相的抗菌素原或抗體，即"免疫吸附劑"（immunosorbent）；（2）酶符號的抗原或抗體，稱為"物"（conjugate）；（3）酶反響的底物。根據(jù)試劑的來歷和標本的狀況以及檢查的具體條件，可規(guī)劃出各種不一樣類型的檢查辦法。用于查驗的ELISA主要有以下幾種類型：
雙抗體夾心法是檢查抗原zui常用的辦法，操作過程如下：
1、將特異性抗體與固相載體聯(lián)結，構成固相抗體。洗刷除掉未的抗體及雜質。
2、加受檢標本，保溫反響。標本中的抗原與固相抗體，構成固相抗原抗體復合物。洗刷除掉別的未物質。
3、加酶標抗體，保溫反響。固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體。*洗刷未的酶標抗體。此刻固相載體上帶有的酶量與標本中受檢抗原的量有關。
4、加底物顯色。固相上的酶催化底物變成有色產品。經(jīng)過比色，測知標本中抗原的量。在查驗中，此法適用于查驗各種蛋白質等大分子抗原，例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只需取得對于受檢抗原的異性抗體，就可用于包被固相載體和制備酶物而建立此法。如抗體的來歷為抗血清，包被和酶標用的抗體別離取自不一樣種屬的動物。如使用單克隆抗體，通常挑選兩個對于抗原上不一樣決議簇的單抗，別離用于包被固相載體和制備酶物。這種雙位點夾心法具有很高的特異性，并且能夠將受檢標本和酶標抗體一同保溫反響，作一步檢查。
在一步法測定中，當標本中受檢抗原的含量很高時，過量抗原別離和固相抗體及酶標抗體，而不再構成"夾心復合物"。類同于沉積反響中抗原過剩的后帶景象，此刻反響后顯色的吸光值（坐落抗原過剩帶上）與規(guī)范曲線（坐落抗體過剩帶上）某一抗原濃度的吸光值一樣（拜見1.3.2，圖1-4），如按常法測讀，所得成果將低于實踐的含量，這種景象被稱為鉤狀效應（hook effect），因為規(guī)范曲線抵達后呈鉤狀彎落。鉤狀效應嚴峻時，反響乃至可不顯色而呈現(xiàn)假陰性成果。因此在使用一步法試劑測定標本中含量可反常增高的物質（例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等）時，應留意可測范圍的zui高值。用高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應。
倘若在被測分子的不一樣位點上富含多個一樣的決議簇，例如HBsAg的a決議簇，也可用對于此決議的同一單抗別離包被固相和制備酶物。但在HBsAg的檢查中應留意亞型疑問，HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4個亞型，盡管每種亞型均有一樣的a決議簇的反響性，這也是用單抗作夾心法應留意的疑問。
ELISA試劑盒雙抗體夾心法測抗原的另一留意點是類風濕因子（RF）的攪擾。RF是一種本身抗體，多為IgM型，能和多種動物IgG的Fc段。用作雙抗體夾心法檢查的血清標本中如富含RF，它可充任抗原成份，一起與固相抗體和酶標抗體，表現(xiàn)出假陽性反響。選用F（ab'）或Fab片段作酶物的試劑，因為去除了Fc段，然后消除RF的攪擾。雙抗體夾心法ELISA試劑是否受RF的影響，已被列為這類試劑的一項查核指標（拜見6.2）。
雙抗體夾心法適用于測定二價或二價以上的大分子抗原，但不適用于測定半抗原及小分子單價抗原，因其不能構成兩位點夾心。