如果您一直被背景問(wèn)題所困擾，那么也許您該花些時(shí)間來(lái)優(yōu)化封閉液。這可能需要時(shí)間，但也是值得的。目前主要有兩種類(lèi)型的封閉液：蛋白和非離子型去污劑。您使用的類(lèi)型須取決于多個(gè)因素，包括微孔板的表面試劑、吸附的抗原、您的抗體和檢測(cè)試劑。好的封閉液應(yīng)降低非特異性結(jié)合，但它不應(yīng)當(dāng)與抗原、抗體或檢測(cè)試劑發(fā)生相互作用。如應(yīng)用針對(duì)抗原分子上兩個(gè)不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標(biāo)抗體，則在測(cè)定時(shí)可使標(biāo)本的加入和酶標(biāo)抗體的加入兩步并作一步這種雙位點(diǎn)一步不但簡(jiǎn)化了操作，縮短了反應(yīng)時(shí)間，如應(yīng)用高親和力的單克隆抗體，測(cè)定的敏感性和特異性也顯著提高。單克隆抗體的應(yīng)用使測(cè)定抗原的elisa試劑盒提高到新水平。

  上海豐壽在一步法測(cè)定中，應(yīng)注意鉤狀效應(yīng)（hookeffect），類(lèi)同于沉淀反應(yīng)中抗原過(guò)剩的后帶現(xiàn)象。當(dāng)標(biāo)本中待測(cè)抗原濃度相當(dāng)高時(shí)，過(guò)量抗原分別和固相抗體及酶標(biāo)抗體結(jié)合，而不再形成夾心復(fù)合物，所得結(jié)果將低于實(shí)際含量。鉤狀效應(yīng)嚴(yán)重時(shí)甚至可出現(xiàn)假陰性結(jié)果。

（三）間接法測(cè)抗體

間接法是檢測(cè)抗體*常用的方法，其原理為利用酶標(biāo)記的抗抗體以檢測(cè)已與固相結(jié)合的受檢抗體，故稱(chēng)為間接法。ELISA試劑盒操作步驟如下：

（1）將特異性抗原與固相載體連接，形成固相抗原：洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。

（2）加稀釋的受檢血清：其中的特異抗體與抗原結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物。經(jīng)洗滌后，固相載體上只留下特異性抗體。其他免疫球蛋白及血清中的雜質(zhì)由于不能與固相抗原結(jié)合，在洗滌過(guò)程中被洗去。

（3）加酶標(biāo)抗抗體：與固相復(fù)合物中的抗體結(jié)合，從而使該抗體間接地標(biāo)記上酶。洗滌后，固相載體上的酶量就代表特異性抗體的量。例如欲測(cè)人對(duì)某種疾病的抗體，ELISA試劑盒可用酶標(biāo)羊抗人IgG抗體。

（4）加底物顯色：顏色深度代表標(biāo)本中受檢抗體的量。

本法只要更換不同的固相抗原，可以用一種酶標(biāo)抗抗體檢測(cè)各種與抗原相應(yīng)的抗體。
用戶(hù)選用試劑盒，主要是為了及時(shí)得到可靠的數(shù)據(jù)。因此，試劑盒實(shí)用性是用戶(hù)選購(gòu)試劑盒的考慮。從實(shí)用的角度來(lái)看，豐壽牌試劑盒必須滿(mǎn)足下述要求。
 
（1）質(zhì)量可靠。在研發(fā)過(guò)程中選擇測(cè)定方法，反復(fù)優(yōu)化測(cè)定體系、測(cè)定條件和操作步驟，并且進(jìn)行多種生物樣品的實(shí)際測(cè)定驗(yàn)證，以確保測(cè)定的專(zhuān)一性、靈敏度、重復(fù)性和回收率；在生產(chǎn)過(guò)程中實(shí)行嚴(yán)格的質(zhì)量控制，主要試劑選擇國(guó)外生產(chǎn)商，并且從固定供應(yīng)商處購(gòu)買(mǎi)，生產(chǎn)人員經(jīng)過(guò)系統(tǒng)經(jīng)久培訓(xùn)，并且建立了嚴(yán)格的質(zhì)量追溯體系。豐壽生物實(shí)行先用后付方法，即用戶(hù)滿(mǎn)意后才付款。萬(wàn)一出現(xiàn)質(zhì)量問(wèn)題，豐壽生物及時(shí)免費(fèi)提供新試劑盒。
 
（2）操作簡(jiǎn)便快捷。首先，測(cè)定方法以分光光度法為主，并且可以用酶標(biāo)儀測(cè)定，保證絕大多數(shù)用戶(hù)都有相應(yīng)的儀器和操作經(jīng)驗(yàn)。其次，保證測(cè)定結(jié)果可靠的基礎(chǔ)上科學(xué)簡(jiǎn)化操作步驟，例如，根據(jù)反應(yīng)步驟配制工作液，顯著減少了用戶(hù)加液次數(shù)，盡量統(tǒng)一加試劑的體積，顯著減少用戶(hù)調(diào)移液器的次數(shù)等等。*后，操作說(shuō)明簡(jiǎn)潔明確，用戶(hù)一看就懂。
 
（3）規(guī)格合理。試劑盒中通常由必須現(xiàn)用現(xiàn)配的試劑。如果保證過(guò)大，用戶(hù)一天內(nèi)不能用完，會(huì)造成試劑浪費(fèi)。因此，常量法豐壽牌試劑盒以50T/48S規(guī)格為主，絕大多數(shù)用戶(hù)能夠一天內(nèi)用完。微量法大規(guī)格包裝可以節(jié)省用戶(hù)經(jīng)費(fèi)。因此，豐壽牌試劑盒也有大包裝試劑盒，其中需要現(xiàn)用現(xiàn)配的試劑，采用分裝成幾個(gè)試劑瓶的方法，方便用戶(hù)分次使用。
 
（4）系列成套，便于用戶(hù)選擇。豐壽生物緊跟研究熱點(diǎn)，針對(duì)某個(gè)研究主題，優(yōu)選測(cè)定指標(biāo)，全面滿(mǎn)足用戶(hù)進(jìn)行該主題研究的需要。