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上海豐壽告訴您:動物血清的使用指南

時間:2020-1-17閱讀:1402
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血清在細胞培養(yǎng)中為細胞供給氨基酸,蛋白質(zhì),維生素(特別是脂溶性維生素如A,D,E,K),碳水化合物,脂肪,激素,成長因子,礦物質(zhì)及微量元素。此外,血清還能夠緩沖培養(yǎng)基,抑制蛋白水解酶,添加培養(yǎng)基的粘度,降低在移液或拌和時造成的剪切力。
關于動物血清的正確使用,這兒做一個簡略的說明。

1、貯存

血清的保質(zhì)期是5年,貯存溫度-10 ~ -30℃。
血清長時間貯存在2-8℃時,血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)或許聚集而構成沉積或可見的混濁。因此,長時間保存血清有必要在-10℃以下貯存,并避免重復凍融。

 

2、熱滅活處理
通常不運用熱滅活血清,除非某些特定的細胞系特別需求。熱滅活會降低或破壞血清中的成長因子,影響某些細胞的成長。
熱滅活zui初是為了滅活補體及支原體?,F(xiàn)在,假如血清中呈現(xiàn)支原體,能夠經(jīng)過過濾去除;而去除補體通常是不必要的,除非是在預備或檢測病毒或細胞毒性試驗時。有研究顯示,血清37℃孵育就能夠滅活血清中熱不穩(wěn)定的補體成分,只要很少一部分細胞在這種滅活血清中成長得更好,如胚胎干細胞和許多昆蟲細胞。
1)按正確操作凍結血清,恢復室溫。
2)水浴56℃提前預熱。
3)將預備好的血清和裝有相同體積水的燒杯一起放入水浴鍋,當燒杯中的溫度計指示達到56℃時開端計時,滅活30min后結束,整個過程中需求隨時搖晃混勻。

 

3、渾濁和沉積

所有的血清或許保存一些纖維蛋白原。某些外部要素或許引發(fā)纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維蛋白,導致血清凍結后或許會觀察到絮狀物或混濁。這些物質(zhì)的存在不會改動血清的性能。
假如想去除這些絮狀沉積物,能夠?qū)⒀宸盅b到無菌離心管中,以低速離心1~2min,上清液即可直接加入到培養(yǎng)基內(nèi)運用。
留意:不要以過濾的方式去除這些絮狀沉積物,由于這或許阻塞濾膜。

 

4、凍結

將血清從冷凍箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。但有必要留意的是,融解過程中有必要規(guī)則地搖晃均勻。
假如在37℃或更高的溫度凍結血清,血清中會呈現(xiàn)沉積。此沉積或許包含磷酸鈣結晶,但不改動血清的性能,相同血清熱滅活也會導致沉積的構成。
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