設(shè)計(jì)ELISA復(fù)孔查看時(shí)，是對(duì)同一個(gè)樣品作兩次稀釋，再分別加到板上的兩個(gè)孔，仍是只稀釋一次，然后汲取兩次分別加到兩個(gè)孔？前者好像把稀釋時(shí)的過(guò)失也考慮到了，但做出來(lái)的效果兩個(gè)孔相關(guān)挺大的。而較常使用的是哪種稀釋方法？

為了減小過(guò)失，是先稀釋再加樣。而針對(duì)這位客戶所遇到的疑問(wèn)，我公司技術(shù)人員是這樣說(shuō)明的：

1. 前者測(cè)的是稀釋和移液的過(guò)失，后者只需移液過(guò)失。

2. 一般都是稀釋一次，分兩孔吧。同濃度的分復(fù)孔。
 
3. 由于是從同一原液稀釋，一般不考慮稀釋過(guò)失(稀釋過(guò)失是存在的)，都是稀釋到想要的倍數(shù)直接分孔(而不是逐個(gè)稀釋，這樣可以使稀釋過(guò)失減小)。

4. 復(fù)孔是為了掃除移液體積，板的影響，以及其他系統(tǒng)過(guò)失的，要求復(fù)孔的濃度是一起的。稀釋后分孔能滿意此要求，逐個(gè)稀釋不能。
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ELISA試劑盒操作技巧
    
1.操作前應(yīng)對(duì)試驗(yàn)的物理參數(shù)有充分的了解，如環(huán)境溫度（保持在18 C～25℃）、反應(yīng)孵育溫度和孵育時(shí)間、洗刷的次數(shù)等，要先查看水育箱溫度，ELISA試劑盒是否符合要求。
    
2.正確使用加樣器加樣器應(yīng)筆直參加標(biāo)本或試劑，避免刮擦包被板底部。加樣過(guò)程中避免液體外濺，血清殘留在反應(yīng)孔壁上，加樣器吸頭要清洗干凈，避免污染，加樣次第要與說(shuō)明書一起，否則可導(dǎo)致效果過(guò)錯(cuò)，試驗(yàn)重復(fù)性差。
    
3.手工洗板加洗液時(shí)沖擊力不要太大，洗刷次數(shù)不要逾越說(shuō)明書舉薦的洗刷次數(shù)，洗液在反應(yīng)孑L內(nèi)停留的時(shí)間不宜太長(zhǎng)。不要使洗液在孑L間竄流，形成孔問(wèn)污染，導(dǎo)致假陰性或假陽(yáng)性。
    
4.要保證加液量一起 我們?cè)谑褂脮r(shí)感覺(jué)滴瓶加液不如加樣器好，滴瓶不易控制加液量禁絕，形成顯色不一致，判別過(guò)錯(cuò)。
    
5.顯色液量不可過(guò)多 加樣的工作環(huán)境不能處于陽(yáng)光直射的環(huán)境下，加顯色系統(tǒng)后要避光反應(yīng)，顯色液量不能過(guò)多，避免顯色過(guò)強(qiáng)。