ELISA實驗方法之直接法僅需要抗原和酶標(biāo)一抗，操作簡便，可避免交叉反應(yīng)，然而該方法要求酶標(biāo)一抗有較高的特異性要求，同時也并非所有的一抗適合標(biāo)記處理。直接法在實際運用中并不多見，它并不能對樣本中抗體進行定量分析，因為樣本中抗體是非酶標(biāo)抗體，無法進行后續(xù)顯色實驗五大檢測方法中的直接法。

首先，將所有血清IgM（包括異性IgM和非特異性IgM）固定在固相上，在去除IgG后再測定特異性IgM。

操作步驟如下：

⑴將抗人IgM抗體連接在固相載體上，ELISA實驗方法之直接法形成固相抗人IgM。洗滌。

⑵加入稀釋的血清標(biāo)本：保溫反應(yīng)后血清中的IgM抗體被固相抗體捕獲。洗滌除去其他免疫球蛋白和血清中的雜質(zhì)成分。

⑶加入特異性抗原試劑：它只與固相上的特異性IgM結(jié)合。洗滌。

⑷加入針對特異性的酶標(biāo)抗體：使之與結(jié)合在固相上的抗原反應(yīng)結(jié)合。洗滌。

⑸加底物顯色：如有顏色顯示，則表示血清標(biāo)本中的特異性IgM抗體存在，ELISA實驗方法之直接法是為陽性反應(yīng)。