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新品免疫ELISA試劑盒檢測(cè)方法

時(shí)間:2014-12-30閱讀:1443
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放射免疫分析常用的有液相法和固相法兩種:(1)液相法:將待檢標(biāo)本(例如含胰島素抗原)與定時(shí)的同位素標(biāo)記的胰島素(抗原)和定時(shí)的抗胰島素抗體混合,經(jīng)一定作用時(shí)間后,分離收集抗原抗體復(fù)合物及游離的抗原,測(cè)定這兩部分的放射活性,計(jì)算結(jié)合率。在反應(yīng)系統(tǒng)中,待檢標(biāo)本的胰島素抗原與同位素標(biāo)記的胰島素競(jìng)爭(zhēng)奪戰(zhàn)性與胰島素抗體結(jié)合。非標(biāo)記的抗原越多,ELISA試劑盒標(biāo)記抗原與抗體形成的復(fù)合物越少。非標(biāo)記抗原含量與標(biāo)記抗原抗體復(fù)合物的量呈一定的函數(shù)關(guān)系。預(yù)先用標(biāo)準(zhǔn)的非標(biāo)記抗原作成標(biāo)準(zhǔn)曲線后,即可查出待檢標(biāo)本中胰島素的含量(2)固相法:將抗原或抗體吸附到固相載體表面,然后加待檢標(biāo)本,zui后加標(biāo)記抗體。測(cè)定固相載體的放射活性,常用的固相載體有溴化氰(CNBr)海豹化的紙片或聚苯乙烯小管。放射免疫分析法應(yīng)用范圍廣泛,包括多種激素(胰島素、生長激素、甲狀腺素等)維生素、藥物、IgE等。
3.酶聯(lián)免疫分析法 酶聯(lián)免疫分析法(enzyme immunoassay,EIA)是當(dāng)前應(yīng)用zui廣泛的免疫檢測(cè)方法。本法將抗原抗體反應(yīng)的特異性與酶對(duì)底物催化作用結(jié)合起來,根據(jù)酶作用底物后顯色,ELISA試劑盒以顏色變化判斷試驗(yàn)結(jié)果,可經(jīng)酶標(biāo)測(cè)定儀作定量分析,敏感度可達(dá)ng水平。常用于標(biāo)記的酶有辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase)、堿性磷酶(alkaline phosphatase)等。它們與抗體結(jié)合不影響抗體活性。這些酶具有一定的穩(wěn)定性,制成酶標(biāo)抗體可保存較長時(shí)間。目前常用的方法有酶標(biāo)免疫組化法和酶聯(lián)免疫吸附法。前者測(cè)定細(xì)胞表面抗原或組織內(nèi)的抗原;后者主要測(cè)定可溶性抗原或抗體。本法既沒有放射性污染又不需昂貴的測(cè)試儀器,所以較放射免疫分析法更易推廣。
(1)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA):是與上述固相RIA相似的原理,將抗原或抗體吸附在固相載體表面。使抗原抗體反應(yīng)在固相載體表面進(jìn)行政區(qū)。ELISA試劑盒可用間接法、雙抗體夾心法或競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)定抗原或抗體。
(2)夾心法(sandwich assay):將已知的特異抗體包裝在固相載體(塑料板凹孔或紙片上),加入待檢標(biāo)本,標(biāo)本中的抗原即可與載體上的抗原結(jié)合,洗去未結(jié)合的材料后加入該抗原的酶標(biāo)記抗體,洗去未結(jié)合的酶標(biāo)抗體,加底物顯色,用酶免疫檢測(cè)儀測(cè)量顏色的光密度,可定量測(cè)定抗原。

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