糖代謝系列_ 果糖激酶(FRK)測試盒
測定方法:微量法
產(chǎn)品規(guī)格:100管/96樣
注 意:正式測定前務(wù)必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定
糖代謝系列_ 果糖激酶(FRK)測試盒
測定意義:
蔗糖是大多數(shù)高等植物從源到庫運輸?shù)闹饕问? 但進入庫器官后被分解為果糖和葡萄糖,果糖在進入下一步代謝前必須由果糖激酶或己糖激酶進行磷酸化,以幫助庫組織的建立和庫強的提高。果糖激酶是催化果糖磷酸化的主要酶,還可以作為植物的己糖感受器和信號分子,通過影響植物的生長周期來調(diào)控植物的代謝和生長發(fā)育進程,在庫組織中發(fā)揮重要的作用。因此,研究果糖激酶對研究植物中果糖代謝調(diào)節(jié)機制具有十分重要的意義。
測定原理:
FRK 催化果糖合成 6-磷酸果糖,6-磷酸果糖在磷酸己糖異構(gòu)酶的作用下異構(gòu)為 6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖脫氫酶進一步催化 6-磷酸葡萄糖脫氫生成 NADH,NADH 在 340nm 有特征吸收峰。
需自備的儀器和用品:
酶標儀、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、96 孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液:100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 25mL×1 瓶, 4℃保存;
試劑二:粉劑×1 瓶,-20℃保存;臨用前加入 12mL 試劑一充分溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融。
試劑三:粉劑×1 瓶,-20℃保存;臨用前加入 3mL 試劑一充分溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融。
試劑四:液體 30μL×1 瓶,4℃保存;臨用前加入 3mL 試劑一充分溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融。
樣本的前處理:
1、細菌或培養(yǎng)細胞:先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細菌或細胞數(shù)量(104 個):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次); 8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
2、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
3、血清(漿)樣品:直接檢測。