花青素合成系列_肉桂酸-4-羥化酶C4H測(cè)試盒
測(cè)定方法：微量法
產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣
注 意：正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
C4H 又稱反式肉桂酸-4-單氧化酶，多存在于高等植物、酵母、菌類中，該酶催化肉桂酸羥化作用產(chǎn)生 4-香豆酸鹽，是苯丙烷途徑中繼 L-苯丙-氨酸解氨酶之后的第二個(gè)關(guān)鍵酶。
花青素合成系列_肉桂酸-4-羥化酶C4H測(cè)試盒
測(cè)定原理：
C4H 催化肉桂酸和 NADP 生成 4-香豆酸鹽和 NADPH，在 340nm 下測(cè)定 NADPH 生成速率，即可反映 C4H 活性。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
提取液：100mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體 25 mL×1 瓶， 4℃保存；
試劑二：粉劑×2 瓶，-20℃保存；
粗酶液提?。?/p>
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）； 8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。
環(huán)保在線