羥甲基戊二酰COA合成酶HMGCS測試盒分光法
測定方法：分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣
注 意：正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
羥甲基戊二酰COA合成酶是甲羥戊酸代謝途徑中的關(guān)鍵酶，催化乙酰CoA與乙酰乙酰CoA生成羥甲基戊二酰CoA。
羥甲基戊二酰COA合成酶HMGCS測試盒分光法
測定原理：
HMGCS催化乙酰CoA與乙酰乙酰CoA生成羥甲基戊二酰CoA，同時(shí)產(chǎn)生CoASH，使DTNB轉(zhuǎn)化為的TNB，在412nm下有特征吸光值。
所需的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
提取液：60mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：粉劑×1瓶，-20℃避光保存；臨用前加入7mL蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；
試劑二：粉劑×1瓶，-20℃避光保存；臨用前加入7mL蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；
試劑三：15mL×1瓶，4℃避光保存。
樣本測定的準(zhǔn)備：
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟：
1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至412nm，蒸餾水調(diào)零。
2、在1 mL玻璃比色皿中加入125μL試劑一、125μL試劑二和250μL試劑三，混勻，加入500μL樣本上清，迅速混勻后記錄412nm下初始吸光值A(chǔ)1和4min后的吸光值A(chǔ)2。計(jì)算ΔA＝A2-A1。
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