氧化與抗氧化系列_--解氨酶(TAL)測試盒
測定方法:微量法
產(chǎn)品規(guī)格:100管/48樣
注 意 :正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義:
TAL廣泛存在于植物和微生物中,是苯--代謝途徑的關(guān)鍵酶之一。TAL能夠躍過肉桂酸-4-羥基化酶(C4H)直接將--轉(zhuǎn)化為香豆酸,香豆酸可進(jìn)一步生成白藜蘆醇、柚皮素等具有抗氧化、抗衰老作用的苯丙素類天然產(chǎn)物。
氧化與抗氧化系列_--解氨酶(TAL)測試盒
測定原理:
TAL能夠分解--產(chǎn)生香豆酸,使反應(yīng)溶液333nm下的吸光度隨反應(yīng)時間而上升,根據(jù)吸光度的變化率可計算出TAL活性。
需自備的儀器和用品:
酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、96孔板(UV板)、研缽、冰和蒸餾水
試劑組成和配制:
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體50mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×2瓶,4℃保存;
試劑三:液體5mL×1瓶,4℃保存;
粗酶液提?。?br/>
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備:
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、血清(漿)果汁等液體樣品:直接檢測。
測定步驟:
1、酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至333nm。
2、準(zhǔn)備96孔UV板一塊(非普通酶標(biāo)板,普通酶標(biāo)板只能透過可見光,不能透過紫外光,檢測波長小于340nm務(wù)必使用UV板)。
3、試劑二的配置:臨用前在試劑二瓶中加入10mL試劑一充分溶解待用(用不完的試劑4℃保存一周,注意現(xiàn)配現(xiàn)用),在37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴10min以上。