UDPG焦磷酸化酶UPG測(cè)試盒_糖原系列_分光法
測(cè)定方法：分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣
注 意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義：
UDPG焦磷酸化酶是生物體糖原合成過(guò)程中的關(guān)鍵酶。在葡萄糖合成糖原前催化葡萄糖活化，將1-磷酸葡萄糖與UTP分子合成為UDP-葡萄糖（UDPG）。
UDPG焦磷酸化酶UPG測(cè)試盒_糖原系列_分光法
測(cè)定原理：
UGP可逆催化反應(yīng)生成1磷酸葡萄糖，在磷酸葡萄糖變位酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶作用下將NADP轉(zhuǎn)化為NADPH，340nm的吸光值增加速率反映了UGP活性。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：
天平、低溫離心機(jī)、研缽、紫外分光光度計(jì)、1 mL石英比色皿。
試劑組成和配制：
提取液：液體50mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體25mL×1瓶，4℃避光保存。
試劑二：粉劑×1 瓶，-20℃避光保存。臨用前加5mL蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑三：粉劑×1瓶，-20℃避光保存。臨用前加5 mL蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑四：粉劑×1瓶，-20℃避光保存。臨用前加5 mL蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑五：液體5mL×1瓶，4℃保存。
酶液提?。?/p>
1.組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于4℃，10000g離心10min，取上清置冰上待測(cè)。
2.細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后4℃，10000g離心10min，取上清置冰上待測(cè)。
3.液體：直接檢測(cè)。
測(cè)定操作：
1.分光光度計(jì)預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm，蒸餾水調(diào)零。
2.取1mL石英比色皿，依次加入500μL試劑一，100μL試劑二，100μL試劑三，100μL試劑四，100μL試劑五，100μL粗酶液，充分混勻，記錄340nm處30s的吸光值A(chǔ)1和330s的吸光值A(chǔ)2，△A=A2-A1
環(huán)保在線